電泳前蛋白煮沸重複實驗時還需要煮嗎

2021-03-04 05:16:59 字數 1098 閱讀 5035

1樓:匿名使用者

重複試驗時不需要煮沸。

蛋白煮沸變性之後是不能再復性的了,所以煮沸一次之後想重複實驗的話不需要煮沸了。

蛋白電泳一般指聚丙烯醯胺凝膠電泳,它有兩種形式:非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(native-page)及sds-聚丙烯醯胺凝膠(sds-page);非變性聚丙烯醯胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質能夠保持完整狀態,並依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。而sds-page僅根據蛋白質亞基分子量的不同就可以分開蛋白質。

2樓:匿名使用者

電泳前蛋

白煮沸,重複實驗時當然需要煮

電泳前蛋白煮沸是為了能讓蛋白和上樣緩衝液中的sds更好的結合,已消除蛋白本身電荷的影響。重複實驗要跑電泳,當然也需要在電泳前將蛋白煮沸。一般重複實驗就是要重複各個實驗步驟,以免最終結果出現差異

電泳為什麼是要將樣品煮沸5分鐘

3樓:匿名使用者

sds-page電泳你做的是變性電泳,也就是加sds,並需要沸煮的. 在沸煮過程中,蛋白樣品必然變性由原來的球狀變成線性,但是形成的時候蛋白質-sds複合物,所以不會沉澱.這種複合物在凝膠中遷移率只跟蛋白質分子量大小有關,所以能進行蛋白的分離鑑定.

marker一般都是預變性的也就是預煮過的,所以可以不用再煮了.

蛋白電泳煮沸到底是什麼作用

4樓:武漢博歐特生物

煮沸是讓蛋白質變性,正常的sds-page,在sds、還原劑和煮沸的作用下,蛋白質的二級**結構都被破壞,二硫鍵也被開啟,蛋白變為線性,且跟大量sds結合,sds的負電荷遮蔽了蛋白本身帶的電荷,這樣,各種蛋白跑得快慢就只跟分子量大小有關。你的實驗中使用的是非還原上樣buffer,如果目的蛋白中有二硫鍵,就無法開啟,尤其是沒煮過的,可能還保留一定的結構和構象,這樣蛋白的遷移率還受蛋白構象影響,跑得稍快可能是跟煮過的相比,其構象更緊密的原因。至於為什麼沒煮過的更接近真實分子量,那是因為你用的上樣buffer是非還原的,連marker的遷移率也不是只跟分子量相關了。

要想準確反映分子量,還是要按標準的sds-page操作,使用還原上樣buffer,煮沸樣品。

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