為什麼sds page電泳時樣品液再加樣前要在沸水中加熱

2021-04-18 15:44:27 字數 2160 閱讀 4821

1樓:墨汁諾

使樣品bai充分變性,伸展,與dusds充分結合,zhi成為雪茄狀,這樣分子量才能

dao用marker計算,因為回marker都是充分變性的。

溴酚答藍在膠中的電泳速度較快,相當於乙個很小的蛋白分子,標記你的樣品在膠中的電泳距離。

蛋白質電泳前,需用樣品緩衝液處理,樣品緩衝液中除sds外,還有還原劑β-巰基乙醇,它可將蛋白質分子中的s-s(二硫鍵)還原。電泳樣品製備時加熱,就是為了加速這些組分與蛋白質的反應。

2樓:***

使樣品充分變性,伸展,與sds充分結合,成為雪茄狀,這樣分子量才能用marker計算,因為marker都是充分變性的。

3樓:匿名使用者

有以下bai幾個原因

1. 讓蛋白樣品充du分變型,破壞zhi其結構性,使其成團狀,便於dao通過凝內膠

2. 使單位質量的蛋白容帶上等量電荷(也就是sds)這樣,當蛋白在凝膠中湧動使,其前進速率只與分子量和場強有關,與本身分子量無關

為什麼sds-page電泳時樣品液再加樣前要在沸水中加熱

4樓:匿名使用者

溴酚藍在膠中的電泳速度較快,相當於乙個很小的蛋白分子,標記你的樣品在膠中的電泳距離。

5樓:友冰衷沛凝

使樣品充分變性,伸展,與sds充分結合,成為雪茄狀,這樣分子量才能用marker計算,因為marker都是充分變性的。

sds-page樣品上樣前為什麼要加熱?

6樓:美和

蛋白質電泳前,需用樣品緩衝液處理,樣品緩

衝液中除sds外,還有還原劑β-巰基乙

專醇,它可將蛋白質

屬分子中的s-s(二硫鍵)還原。電泳樣品製備時加熱,就是為了加速這些組分與蛋白質的反應。

問一下你們試驗提取的是不是總蛋白?還是特定的一種蛋白?我想應該是提的總蛋白,那麼就應該做到:

盡量提取完全;應使所有蛋白全部處於溶解狀態;防止發生蛋白的降解、聚集、沉澱、變性。看看你的目的蛋白的特性,是親水性的還是疏水性的,再決定留上清還是沉澱,如你的樣品是蛋白質沉澱物,加入50--100ul的sds加樣緩衝液並在同樣加熱後在上樣

sds-page樣品上樣前為什麼要加熱

7樓:北京索萊寶科技****

蛋白質電泳前,需用樣品緩衝液處理,樣品緩衝液中除sds外,還有還原劑β-巰基乙醇,它可將蛋白質分子中的s-s(二硫鍵)還原.電泳樣品製備時加熱,就是為了加速這些組分與蛋白質的反應.

8樓:匿名使用者

你好, 作用原理:聚丙烯醯胺凝膠為網狀結構,具有分子篩效應。它有兩種形式:

非變性內聚丙烯醯胺凝膠電泳(容native-page)及sds-聚丙烯醯胺凝膠(sds-page);非變性聚丙烯醯胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質能夠保持完整狀態,並依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。

而sds-page僅根據蛋白質亞基分子量的不同就可以分開蛋白質。該技術最初由shapiro於2023年建立,他們發現在樣品介質和丙烯醯胺凝膠中加入離子去汙劑和強還原劑(sds即十二烷基硫酸鈉)後,蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決於亞基分子量的大小(可以忽略電荷因素)。希望能幫到你。

我提取的未知的粗酶液,做sds-page電泳,為什麼蛋白樣品要煮沸處理?煮沸離心後我的蛋白是不是會被離掉?

9樓:匿名使用者

sds-page電泳你做的是變性電泳,也就是加sds,並需要沸煮的。

在沸煮過程中,蛋白樣品必然變性由原來的球狀變成線性,但是形成的時候蛋白質-sds複合物,所以不會沉澱。這種複合物在凝膠中遷移率只跟蛋白質分子量大小有關,所以能進行蛋白的分離鑑定。

marker一般都是預變性的也就是預煮過的,所以可以不用再煮了。

10樓:匿名使用者

就是讓蛋白變性啊,讓蛋白的二級結構開啟變成一級的線性結構,marker不需要煮沸,在你買maker之前這些marker就已經被處理好了,你只需要在上樣的時候將marker加入就行了

11樓:幼稚辣椒

為了使蛋白變性,使得電泳時只以蛋白分子大小來分離不同的蛋白。

maker也是要煮沸的。

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