生物中的引物是什麼東西,PCR引物是什麼?

2021-03-04 06:14:32 字數 2543 閱讀 2847

1樓:偷星

引物(dna,rna的) primer 指在核酸合成反應時,作為每個多核苷酸鏈進行延伸的出發點而起作用的多核苷酸鏈,在引物的3′-oh上,核苷酸以二酯鏈形式進行合成,因此引物的3′-oh,必須是游離的。dna複製過程大致可以分為複製的引發,dna鏈的延伸和dna複製的終止三個階段。 複製的引發(priming)階段包括dna複製起點雙鏈解開,通過轉錄啟用步驟合成rna分子,rna引物的合成,dna聚合酶將第乙個脫氧核苷酸加到引物rna的3'-oh末端複製引發的關鍵步驟就是前導鏈dna的合成,一旦前導鏈dna的聚合作用開始,滯後鏈上的dna合成也隨著開始,在所有前導鏈開始聚合之前有一必需的步驟就是由rna聚合酶(不是引物酶)沿滯後鏈模板轉錄一短的rna分子。

在有些dna複製中,(如質粒cole),該rna分子經過加式成為dna複製的引物。但是,在大部分dna複製中,該rna分子沒有引物作用。它的作用似乎只是分開兩條dna鏈,暴露出某些特定序列以便引發體與之結合,在前導鏈模板dna上開始合成rna引物,這個過程稱為轉錄啟用(transcriptional activation),在前導鏈的複製引發過程中還需要其他一些蛋白質,如大腸桿菌的dnaa蛋白。

這兩種蛋白質可以和複製起點處dna上高度保守的4個9bp長的序列結合,其具體功能尚不清楚。可能是這些蛋白質與dna複製起點結合後能促進dna聚合酶ⅲ複合體的七種蛋白質在複製起點處裝配成有功能的全酶。dna複製開始時,dna螺旋酶首先在複製起點處將雙鏈dna解開,通過轉錄啟用合成的rna分子也起分離兩條dna鏈的作用,然後單鏈dna結合蛋白質結合在被解開的鏈上。

由複製因子x(n蛋白),複製因子y(n'蛋白),n"蛋白,i蛋白,dnab蛋白和dnac蛋白等6種蛋白質組成的引發前體(preprimosome),在單鏈dna結合蛋白的作用下與單鏈dna結合生成中間物,這是一種前引發過程。引發前體進一步與引物酶(primase)組裝成引發體(primosome)。引發體可以在單鏈dna上移動,在dnab亞基的作用下識別dna複製起點位置。

首先在前導鏈上由引物酶催化合成一段rna引物,然後,引發體在滯後鏈上沿5'→3'方向不停的移動(這是一種相對移動,也可能是滯後鏈模板在移動,見後),在一定距離上反覆合成rna引物供dna聚合酶ⅲ合成岡崎片段使用,引發體中許多蛋白因子的功能尚不清楚。但是,這些成份必須協同工作才能使引發體在滯後鏈上移動,識別合適的引物合成位置,並將核苷酸在引發位置上聚合成rna引物。由於引發體在滯後鏈模板上的移動方向與其合成引物的方向相反,所以在滯後鏈上所合成的rna引物非常短,一般只有3-5個核苷酸長。

而且,在同一種生物體細胞中這些引物都具有相似的序列,表明引物酶要在dna滯後鏈模板上比較特定的位置(序列)上才能合成rna引物。

pcr引物是什麼?

2樓:點點星光帶晨風

聚合酶鏈式反應簡稱pcr(polymerase chain reaction) (又稱:多聚酶鏈式反應) pcr是體外酶促合成特異dn**段的一種方法,由高溫變性、低溫退火(復性)及適溫延伸等反應組成乙個週期,迴圈進行,使目的dna得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。

它不僅可用於基因分離、轉殖和核酸序列分析等基礎研究,還可用於疾病的診斷或任何有dna,rna的地方。pcr又稱無細胞分子轉殖或特異性dna序列體外引物定向酶促擴增技術。

3樓:暴走少女

pcr引物又稱為寡核苷酸引物,也就是rna,是由人工合成的,分為兩種,引物1和引物2。由於dna聚合酶只能從核苷酸鏈的5'端到3'端進行複製,也就是只能識別3'的尾端。

而且只能把核苷酸連到已經和dna模板互補產生的多核苷酸鏈上,所以引物1和2分別於雙鏈dna的兩條鏈的尾部(就是末尾是3'端的那一邊)結合,為那些脫氧核苷酸提供3'的末端,就相當於開了個頭。然後在dna聚合酶的作用下合成兩條新鏈。而那段引物就成了新鏈的一部分。

4樓:白色的妖精

通俗的講,引物就是為了增幅目的dna而匯入的短小dn**斷,在pcr反應中,新合成的dna是要接在引物上才能繼續按照模版dna複製。引物的設計因需要增幅的序列而不同。舉個例子來說,你要增幅如下序列:

accctcccgccccccccgtat

(互補鹼基不寫了)

那麼一般來說,你就要匯入以accctc結尾的引物使得增幅繼續下去,具體方法和注意事項樓主可以看gee_an大俠的資料。

查了一下測序公司的網頁,如果要同定微生物,樓主需要準備如下東東:

1、待測菌體。試管或培養皿都可以,但必須是純粹的待測菌體,不能含有其他的微生物。

2、提純的dna。如果1有致病性或傳染性,那麼樓主就得自己提純dna再交給測序公司。dna純度要求可以做pcr。

ps:很佩服樓主充足的經費,我們這裡同定一次要2800人民幣……

5樓:匿名使用者

pcr的目的是大量擴增你所需要的片斷。換句話說,就是用人工的方法大量複製dna。而dna的複製是以一條鏈為模板,新合成鏈按照鹼基互補配對進行的。

可是有乙個問題,dna的合成必須是前端有一小段序列,他接著這段序列合成,而不能從無到有,憑空合成。它前面這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是dna也可以是rna,一般20多bp.

需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物

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