DNA分子雜交技術主要有哪些應用

2021-03-04 04:53:33 字數 4721 閱讀 8184

1樓:匿名使用者

dna分子雜交的基礎是,具有互補鹼基序列的dna分子,可以通過鹼基對之間形成氫鍵等,形成穩定的雙鏈區。在進行dna分子雜交前,先要將兩種生物的dna分子從細胞中提取出來,再通過加熱或提高ph的方法,將雙鏈dna分子分離成為單鏈,這個過程稱為變性。然後,將兩種生物的dna單鏈放在一起雜交,其中一種生物的dna單鏈事先用同位素進行標記。

如果兩種生物dna分子之間存在互補的部分,就能形成雙鏈區。由於同位素被檢出的靈敏度高,即使兩種生物dna分子之間形成百萬分之一的雙鏈區,也能夠被檢出。

核酸分子雜交具有很高的靈敏度和高度的特異性,因而該技術在分子生物學領域中已廣泛地使用於轉殖基因的篩選、酶切圖譜的製作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學領域中具有廣泛地應用,而且在臨床診斷上的應用也日趨增多。

dna分子雜交技術和分子雜交技術有什麼區別

2樓:表躍藤顏

分子雜交是測是否轉錄,因為只有mrna中有rna,dna分子雜交是測是否將目的基因匯入受體之中,dna對應dna

3樓:筱果

dna分子雜交技術是用一條dna單鏈去鑑別待測dna鏈的基因組成的一項技術。是一種dna鑑定方法。

dna分子水平技術包含了後者,涵蓋了所有分子水平上的dna技術。

希望對你能有所幫助。

分子雜交的雜交技術應用

4樓:莦

作為探針的已知dna或rn**段一般為30~50核苷酸長,可用化學方法合成或者直接利用從特定細胞中提取的mrna。探針必須預先標記以便檢出雜交分子。標記方法有多種,常用的為同位素標記法和生物素標記法。

雜交方法又可分為液相雜交和固相雜交。

使單鏈dna或 rna分子與具有互補鹼基的另一dna或rna 片斷結合成雙鏈的技術。即核酸分子間的雜交。相互雜交的兩種核酸分子間有時並非完全一致,但必有一定的相關性。

早在2023年有人建立了dna與rna間的分子雜交,但至70年代才發展成基因分析中一種重要的分析技術,可鑑定基因的特異性。例如可將具有一定已知順序的某基因的 dn**段,標上放射性核素,構成核酸探針,將它通過分子雜交與缺陷的基因結合,產生雜交訊號,從而把缺陷的基因顯示出來,藉此可對許多遺傳性疾病進行產前診斷。現又用核酸分子雜交技術診斷B型肝炎,以及研究其他病毒性疾病和癌瘤的基因結構(癌基因)等。

核酸分子雜交的方法並不複雜。在雜交前先把待分析的dna加熱或加鹼使之變性,分開成單鏈;然後加入放射性核素標記的核酸探針,降溫退火,即獲帶有放射性核素標記的雙鏈雜交分子。2023年又發展成轉膜雜交,即將電泳分開的核酸片段,經過轉移電泳轉移到硝酸纖維素膜上,進行固相雜交反應,用放射自顯影檢出之。

此即著名的薩瑟恩氏印跡法。

無庸置疑,分子雜交的基礎是兩個核酸分子間的完全一致,或有一定的相似性或相關性。若所用的核酸探針的片段較長(幾百個核苷酸以上),可以得到很準確的鑑定結果。但若人工合成的寡核苷酸探針片段較短(如20~30個核苷酸),則難免會出現準確性差的假陽性現象。

現又有非放射性核素標記核酸探針,如以鹼性磷酸酶標記的酶標核酸探針,以及以生物素標記的核酸探針等,這必將有助於推動分子雜交在臨床醫學中的廣泛應用。 雙鏈,則須先變性成為單鏈)結合到硝酸纖維素膜上,然後與溶液中的標記探針進行雜交。通過與電泳法和放射自顯影法結合,獲得雜交圖譜,再進行定性或定量分析。

分子雜交方法廣泛用於生物化學、分子生物學中作為核酸片段鹼基序列的檢測與鑑定手段。在醫學領域中已用於某些病毒或細菌引起的感染性疾病的診斷。它也可用於基因工程。

不同**蛋白質的亞基結合過程也可稱為雜交。

分子雜交(molecular hybridization)不同**的核酸單鏈之間或蛋白質亞基之間由於結構互補而發生的非共價鍵的結合。根據這一原理發展起來的各種技術統稱為分子雜交技術,核酸分子雜交技術是分子遺傳學中的重要研究方法。

核酸分子雜交具有互補的鹼基順序的單鏈核酸分子,可以通過鹼基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即能出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜種分子的形成並不要求兩條單鏈的鹼基順序完全互補,所以不同**的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜種雙鏈。使單鏈聚合為雙鏈的過程稱為退火或復性。

用分子雜交進行定性或定量分析的最有效方法是將一種核酸單鏈用同位素標記成為探針,再與另一種核酸單鏈進行分子雜交。由於同位素被檢出的靈敏度高,所以在兩種核酸分子之間即使只有百萬分之一的同源順序也可以彼檢出。

核酸分子雜交按雜交中單鏈核酸所處的狀態可分為液相、固相和原位3類。前二類方法都要求預先從細胞中分離並純化雜交用的核酸。在液相分子雜交中,兩種**的核酸分子都處於溶液中,可以自由運動,其中有一種常是用同位素標記的。

從復性動力學資料的分析可探知真核生物基因組結構的大致情況,如各類重複順序的含量及分布情況等。在固相分子雜交中,一種核酸分子被固定在不溶性的介質上,另一種核酸分子則處在溶液中,兩種介質中的核酸分子可以自由接觸。常用的介質有硝酸纖維素濾膜、羥基磷灰石柱、瓊脂和聚丙烯醯胺凝膠等。

早期用瓊脂作為固定介質的分子雜交方法曾被用來測定從細菌到人多種生物的dna的同源程度。

2023年由e.薩瑟恩首創的薩瑟恩吸印法是一種方便易行的固相雜交方法。先將待測的dna用限制性內切酶切成片段,然後通過凝膠電泳把大小不同的片段分開,再把這些dn**段吸印到硝酸纖維膜上,並使吸附在濾膜上的dna分子變性,然後和預先製備的dna或rna探針進行分子雜交,最後通過放射自顯影就可以鑑別待測的哪個dn**段和探針具有同源順序。精確控制雜交及洗滌條件(如溫度及鹽濃度),在同源順序中即使有一對鹼基錯配也可檢出。

這技術已應用於遺傳病(基因病)的臨床診斷。另一種相似的方法是將待測的rn**段吸印在重氮苄氧甲基(dbm)纖維素膜或濾紙上,然後和預先製備的dna探針進行分子雜交,這種方法稱為諾森吸印法。這些技術大大地推進了分子遺傳學研究和重組dna技術的應用。

原位(分子)雜交實際上是固相雜交的另一種形式,雜交中的一種dna處在未經抽提的染色體上,並在原來位置上被變性成單鏈,再和探針進行分子雜交。在原位雜交中所使用的探針必須用比活性高的同位素標記。雜交的結果可用放射自顯影來顯示,出現銀粒的地方就是與探針互補的順序所在的位置。

基因定位

在基因定位的工作中,對固定在細胞學製片上的染色體dna進行原位雜交,可以將與探針互補的順序精確地定位到染色體的一定位置上。

在基因定位工作中,還可以應用一種在電鏡下直接觀察雜種分子的原位雜交方法,即所謂的r-環法。r-環是在雙鏈dna分子部分變性的情況下,單鏈的rna分子和相應的dna序列中的一條互補的單鏈形成rna-dna的雜合雙鏈,同時dna的另一條單鏈向外突出而形成的環狀圖象。由於每種mrna由特定的基因所轉錄,和這一基因的乙個dna單鏈具有互補結構,因此通過觀察標記mrna參與構成的r環的位置就可以對產生這種mrna的基因進行定位,這一方法還可以用來研究斷裂基因的結構。

在重組dna技術中,有些專門的原位雜交方法可以用來篩選有探針順序的重組質粒或噬菌體。此外,分子雜交方法還可以用來分離具有特定順序的核酸分子。例如使探針與細胞的總dna進行分子雜交,利用羥基磷灰石柱只吸附雙鏈分子的特性,可以分離與探針互補的dn**段或rna分子。

蛋白質分子雜交來自不同的蛋白質的亞基間也可以形成非共價鍵的結合,這是蛋白質分子雜交的基礎。蛋白質分子雜交技術可以用來研究蛋白質的結構和功能以及相似的蛋白質(如同工酶、血紅蛋白等)的親緣關係。例如通過人、狗、兔、驢、小鼠和蛙等動物的血紅蛋白的蛋白質分子雜交測驗,根據能否形成雜種分子和雜種分子的量,可以判斷它們的蛋白質分子的相似程度。

分子雜交是通過配對鹼基對之間的非共價鍵(主要是氫鍵)結合,從而形成穩定的雙鏈區。雜交分子的形成並不要求兩條單鏈的鹼基順序完全互補,所以不同**的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在dna與dna、rna與rna或rna與dna的二條單鏈之間進行。

由於dna一般都以雙鏈形式存在,因此在進行分子雜交時,應先將雙鏈dna分子解聚成為單鏈,這一過程稱為變性,一般通過加熱或提高ph值來實現。用分子雜交進行定性或定量分析的最有效方法是將一種核酸單鏈用同位素或非同位素標記成為探針,再與另一種核酸單鏈進行分子雜交。

雜交型別

dna分子雜交技術中 究竟是什麼和什麼雜交

5樓:匿名使用者

探針是人工合成的,序列是按照已知的序列(和要探測基因組的序列互補)。探針還帶有螢光,或者同位素等示蹤劑。用來顯影。

探針一般長度都很短,最多就是個鹼基對。不是直接從基因組提取出來的。

6樓:匿名使用者

兩個基因組不是同乙個基因組,從乙個乙隻目的基因片段的基因組中獲得目的基因片段,再用該目的片段與未知的基因組雜交,就可以知道這個未知的基因組是否含有該目的基因片段,該技術又稱為southern雜交。

7樓:匿名使用者

互補的核苷酸序列通過walson-crick鹼基配對形成穩定的雜合雙鏈分子dna分子的過程稱為雜交。專雜交過程是高度特異屬性的,可以根據所使用的探針對已知序列進行特異性的靶序列檢測。   雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。

該檢測物件可以是轉殖化的基因組dna,也可以是細胞總dna或總rna。根據使用的方法被檢測的核酸可以是提純的,也可以在細胞內雜交, 即細胞原位雜交。探針必須經過標記,以便示蹤和檢測。

使用最普遍的探針標記物是同位素, 但由於同位素的安全性,近年來發展了許多非同位素標記探針的方法,例如,使用螢光分子。   核酸分子雜交具有很高的靈敏度和高度的特異性,因而該技術在分子生物學領域中已廣泛地使用於轉殖基因的篩選、酶切圖譜的製作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學領域中具有廣泛地應用,而且在臨床診斷上的應用也日趨增多。

利用dna探針還可以用於環境監測,如檢測飲用水中病毒的含量。此法更快速、靈敏。

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