原位雜交技術的原位雜交技術分類,原位雜交技術的原位雜交的基本原理

2021-03-04 04:53:33 字數 2757 閱讀 2069

1樓:手機使用者

原位pcr技術是常規的原位雜交技術與pcr技術的有機結合,即通過pcr技術對靶核酸序列在染色體上或組織細胞內進行原位擴增使其拷貝數增加,然後通過原位雜交技術進行檢測,從而對靶核酸序列進行定性、定位和定量分析。原位pcr技術大大提高了原位雜交技術的靈敏度和專一性,可用於低拷貝甚至單拷貝的基因定位,為原位雜交技術的發展提供了更廣闊的發展前景。

原位雜交技術因其高度的靈敏性和準確性而日益受到許多科研工作者的歡迎,並廣泛應用到基因定位、性別鑑定和基因圖譜的構建等研究領域。目前原位雜交技術在植物中的應用比較廣泛,例如在棉花、麥類和樹木等的遺傳育種方面取得了顯著的成就,在畜牧上原位雜交技術主要用於基因定位和基因圖譜的構建以及轉基因的檢測和性別鑑定等方面。在水產方面,原位雜交技術則主要應用於基因定位(多見於對魚類和貝類等水生物的研究)和病毒的檢測(多見於蝦類)。

此外,原位雜交技術做為染色體高分辨顯帶技術的補充和發展,在水生物的細胞遺傳學的研究領域將發揮更重要的作用。同其他的生物技術一樣,原位雜交技術在其發展與應用的過程中會出現一些問題,但隨著原位雜交技術的不斷改進與完善以及檢測手段的改進,原位雜交技術的優越性越來越突出,其應用也會更加廣泛。

原位雜交技術的原位雜交的基本原理

2樓:哈比

原位雜交技術的基本原理是利用

核酸分子單鏈之間有互補的鹼基序列,將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測dna或rna互補配對,結合成專一的核酸雜交分子,經一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件:組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結合的標記物(曾呈奎等2000) 。

rna原位核酸雜交又稱rna原位雜交組織化學或rna原位雜交。該技術是指運用crna或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內rna表達的一種原位雜交技術。其基本原理是:

在細胞或組織結構保持不變的條件下,用標記的已知的rna核苷酸片段,按核酸雜交中鹼基配對原則,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結合(雜交),所形成的雜交體 (hybrids)經顯色反應後在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細胞內相應的mrna、rrna和trna分子。rna原位雜交技術 經不斷改進,其應用的領域已遠超出dna原位雜交技術。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已 成為最有效的分子病理學技術,同時在分析低豐度和罕見的mrna表達方面已展示了分子生物學的一重要方向。

原位雜交的基本定義

3樓:溫柔_654蕎

原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交。

使用dna或者rna探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。

rna原位核酸雜交又稱rna原位雜交組織化學或rna原位雜交。該技術是指運用crna或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內rna表達的一種原位雜交技術。其基本原理是:

在細胞或組織結構保持不變的條件下,用標記的已知的rna核苷酸片段,按核酸雜交中鹼基配對原則,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結合(雜交),所形成的雜交體 (hybrids)經顯色反應後在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細胞內相應的mrna、rrna和trna分子。rna原位雜交技術 經不斷改進,其應用的領域已遠超出dna原位雜交技術。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已 成為最有效的分子病理學技術,同時在分析低豐度和罕見的mrna表達方面已展示了分子生物學的一重要方向。

fish是原位雜交技術大家族中的一員,因其所用探針被螢光物質標記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發明,現已從實驗室逐步進入臨床診斷領域。基本原理是螢光標記的核酸探針在變性後與已變性的靶核酸在退火 溫度下復性;通過螢光顯微鏡觀察螢光訊號可在不改變被分析物件(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。dna螢光標記探針是其中最常用的一類核酸探針。

利用此探針可對組織、細胞或染色體中的dna進行染色體及基因水平 的分析。螢光標記探針不對環境構成汙染,靈敏度能得到保障,可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導致的週期過程和技術障礙。

螢光原位雜交技術的簡介

4樓:蘇荷

2023年,gall和pardue等首次將同位素探針用於原位雜交實驗,獲得成功。2023年,染色體原位抑制雜交法的建立,使fish技術得以迅速發展。隨後,cremer等用生物素和汞或氨基乙醯螢光素等非放射性物質標記探針,創立了雙色fish技術。

2023年,nederlof等用3種螢光素成功探測出了3種以上的靶位dna序列,從而宣告了多色fish技術的問世。  fish技術是一種非放射性分子遺傳學實驗技術,其基本原理是將直接與螢光素結合的寡聚核苷酸探針或採用間接法用生物素、地高辛等標記的寡聚核苷酸探針與變性後的染色體、細胞或組織中的核酸按照鹼基互補配對原則進行雜交,經變性—退火—復性—洗滌後即可形成靶dna 與核酸探針的雜交體,直接檢測或通過免疫螢光系統檢測,最後在螢光顯微鏡下顯影,即可對待測dna進行定性、定量或相對定位分析。  fish技術有以下幾點優勢:

① 安全、快速、靈敏度高;

② 探針能較長時間儲存;

③ 多色標記,簡單直觀;

④ 可用於中期染色體及間期細胞的分析;

⑤ 可應用於新鮮、冷凍或石蠟包埋標本以及穿刺物和脫落細胞等多種物質的檢測。

原位核酸分子雜交技術簡稱原位雜交(in situ hybridization,ish)含義是什麼

5樓:匿名使用者

免疫組化的結果應該用「雷射共聚焦顯微鏡」而不是文中所說的「電子顯微鏡「。

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