1樓：南工慢遊
用限制酶切法直接從染色體dna切除
請教細菌基因敲除的一般步驟
2樓：匿名使用者
利用基因打靶技術產生轉基因動物的程式一般為： 將基因打靶載體通過一定的方式(常用電穿孔法)匯入同源的胚胎幹細胞(escell)中，使外源dna與胚胎幹細胞基因組中相應部分發生同源重組，將打靶載體中的dna序列整合到內源基因組中從而得以表達。一般地，顯微注射命中率較高，但技術難度較大，電穿孔命中率比顯微注射低，但便於使用。
用選擇性培養基篩選已擊中的細胞
一般地，篩選使用正、負選擇法，比如用g418篩選所有能表達neo基因的細胞，然後用ganciclovir淘汰所有hsv-tk正常表達的細胞，剩下的細胞為命中的細胞。由於用於tk篩選的gancyclovir對小鼠的種系傳遞有影響，一般採用dta(白喉毒素a亞基）進行陰性篩選。將篩選出來的靶細胞匯入鼠的囊胚中，再將此囊胚植人假孕母鼠體內，使其發育成嵌合體小鼠。
通過觀察嵌和體小鼠的生物學形狀的變化進而了解目的基因變化前後對小鼠的生物學性狀的改變，達到研究目的基因的目的。
利用「基因敲除」技術，能「敲除」dna上的特定基因．該技術的主要過程示意圖如下：（1）胚胎幹細胞可從小
3樓：k笨蛋
（1）胚胎幹細胞可以從早期胚胎或原始性腺中分離得到．
（2）基因工程用到的工具酶包括限制酶和dna連線酶；基因是控制生物性狀的基本單位，當neor基因插入靶基因後將導致靶基因的結構被破壞，失去原有的結構和功能．所以靶基因失活」的含義是 靶基因中的脫氧核苷酸序列發生改變，不能表達．
（3）從**中可以看出，失活靶基因與正常靶基因是同源互換，故兩者互換片段屬於基因重組；因為neor基因是新黴素抗性基因，經處理後的胚胎幹細胞獲得了neor基因，所以能在含新黴素的培養基上生存，而未經處理的胚胎幹細胞在此培養基上無法生存，故「特定培養基」需加入新黴素才能起到選擇作用．
（4）培養圖示中胚胎幹細胞所獲得的「基因敲除」小白鼠不能直接用於研究基因功能，因為該小白鼠體內仍有乙個正常的靶基因，也可能表達性狀．
故答案為：
（1）早期胚胎或原始性腺
（2）限制性核酸內切酶（或限制酶） dna連線酶 靶基因中的脫氧核苷酸序列發生改變，不能表達
（3）基因重組 新黴素
（4）不能 因為該小白鼠體內仍有乙個正常的靶基因，也可能表達性狀
基因過表達跟沉默操作步驟一樣嗎
4樓：匿名使用者
顧名思義，基因過表達是將某個基因大量表達的過程。這個過程可以是在基因原本所在的細胞中，也可以是在其它表達系統中進行。其基本原理是通過人工構建的方式在目的基因上游加入調控元件，使基因可以在人為控制的條件下實現大量轉錄和翻譯，從而實現基因產物的過表達。
現在有很多成熟的表達系統用於基因過表達，常用的包括：大腸桿菌表達系統，酵母表達系統，昆蟲表達系統，哺乳動物細胞表達系統和體外翻譯系統（無細胞體系）。雖然這些系統各不相同，但過表達的基本步驟相似。
構建轉殖。將目的基因連線在特定的載體上，載體種類依據表達系統差異而不同。在載體上一般含有增強基因轉錄的promoter，不同系統中採用的promoter完全不同。
將轉殖匯入表達細胞中。在大腸桿菌，酵母和哺乳動物細胞中，構建的外源質粒直接匯入細胞即可，這個過程稱為轉化或轉染。對於昆蟲表達系統，構建的質粒還需要先轉座成為桿狀病毒基因組才能用於轉染。
基因的表達。在昆蟲和哺乳動物細胞體系中，轉染進入細胞內的外源基因在其上游強啟動子的作用下可以直接過量表達。在大腸桿菌系統中，需要加入額外的誘導劑（常用iptg）誘導表達，酵母系統中有的也需要誘導表達（例如甲醇誘導）。
體外翻譯系統不用細胞，常常在細胞提取物（模擬細胞內環境）中進行基因的過量轉錄和翻譯，其基本步驟中沒有上訴第二步。
基因過表達的目的一般有兩種，一是獲取大量的目的基因產物，二是研究目的基因產物的生物學功能。
過表達可以讓我們得到大量的目的基因產物（一般是蛋白質），用於研究或生產。比如x射線晶體學研究蛋白質三維結構首先就需要過量表達得到目的蛋白。發酵工程製備胰島素，taq酶等蛋白類產品都需要過表達。
為了研究某乙個基因產物的功能，可以在體內（一般是在這個基因本來所在的細胞中）將這個基因過表達,檢測細胞的生理學變化。它和基因敲除是研究基因功能的兩個重要手段。
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