ELISA試驗中陰性對照的目的和作用?陽性對照的目的和作用?空白的目的和作用

2021-04-12 19:55:15 字數 3383 閱讀 8377

1樓:糟油酒丸

陰性對照的目的是排除假陽性,陰性對照就是乙個確定肯定已知是陰性的東專西,屬如果結果出來這個樣本顯示陽性了,那你elisa就做出問題了。其他未知樣本,數值同它一樣或者更低的,全部認為是陰性結果。

陽性對照的目的是排除假陰性,陽性對照就是乙個確定肯定已知是陽性的東西,如果結果出來這個樣本測不出陽性反應,那你elisa就做出問題了。

空白有的時候可以當作是一種陰性對照。空白的特別意義在於測定實驗的背景雜訊。也就是說,空白樣本被測得到的數值,告訴你未知樣本的讀數當中,有多少數值是背景,多少是真實特異性的反應所得。

elisa,陰性對照,陽性對照及空白對照是怎麼回事

2樓:南京金益柏

什麼是「有效性」(validity)?要獲得準確的檢測結果「有效性」評價,就會關係到:為什麼要設定「陰性、陽性和空白」等不可缺少的三項對照?

要用什麼樣的物質擔當「陰性、陽性和空白對照(品)」?這「三項對照」如何設定、需要設定幾個孔位?獲得的測定值如何「認可、取捨與計算」?

隨後,又如何依照陽性對照均值(pcx)與陰性對照均值(ncx)的差值(p-n,或n-p)大小做出「試驗結果有效性」的最終裁決呢?…等等。

elisa檢測,按照試劑說明書要求,每次試驗、每塊扳上都要設定以下3項對照和用途:

2.陰性對照(品):

(1)陰性對照(品)的概念與要求:所謂陰性對照(品),應當是本項檢測試驗中採用與待撿物(樣品、人用試劑就是人的血清等)具有同源性和同質性,又不含有待檢物質,並能客觀比較和鑑別處理因素(血清免疫學試驗中有特異性抗原與抗體反應)之間的差異。因此,用動物血清或其製品(如牛血清白蛋白等)代替陰性人血清作為對照品,從理論和實踐上都是不可取的,弊端甚多,無須細述。

注意:據我所知,國產elisa試劑中,有的廠牌是用動物血清製品稀釋配置、或與部分人血清混合配置的;其二,陰性對照讀數,並非是「越低越好」。ncx值接近0.

00x水平,這是假象!試想一下,真正採用「陰性人血清」的陰性對照品,ncx值會如此之低嗎?舉個例子,雅培B肝六項eia試劑的ncx值,分別為:

0.010(hbsag)、0.027(抗—hbs)、0.

035(hbeag)、1.083(抗—hbe)、1.065(抗—hbc)、0.

045(抗hbc-igm)。生物梅里埃的hiv試劑ncx是0.091。

辨別試劑ncx值是否合理的乙個很簡單的方法,只要對比大量陰性樣本的實際讀數就「一目了然」啦!

乙個題外插曲:表明elisa試劑內在質量的乙個重要統計標誌,就是要看:陰性樣本的的上限不應當大於、必須小於c.

o.i.=1.

00;反之,陽性樣本的的下限不可小於、應當大於c.o.i.

=1.00!

(2)陰性對照(品)分為兩類

一是代表受檢人血清中並不含有、或方法學靈敏度未能檢出的待檢物的基準水平,並且是結果判斷值(cut off)計算式中決定「是」(陽性)、或「否」(陰性)的唯一可變值。陰性對照值高,導致假陰性;反之,導致假陽性。如:

hbsag、hbeag、抗—hbc等。二是陰性對照設定,在方法學上要求加入指示性定量標準品,如中和劑hbeag,定量hbcag等,用以檢測抗—hbe、抗—hbc。或者,選取代表平均水平的正常人血清用作陰性對照,如檢測抗—hbc igm。

此類cut off 值計算時,多數均包括陰性和陽性對照值2個可變值。

3.陽性對照(品):

(1)陽性對照(品)的概念與要求:同陰性對照(品),只是採用「精選」的含有待檢物質的人血清製備而成。所謂「精選」,就是把收集的陽性人血清經過數種試驗進行「篩試」、把含有「干擾性物質」的血清剔除、不用,以避免出現「假陽性」干擾試驗結果。

(2)陽性對照(品)設定,也可區分為兩種型別與用途:

一是陽性對照主要用於評價該項試驗結果是否有效和試驗結果的穩定性與可比性。而所設的陽性對照的測量值不列入cut off值計算、但是不可不做。如hbsag、抗—hbs、hbeag等。

二是陽性對照的設定,不僅用於評價試驗結果是否有效和試驗結果的穩定性與可比性,而且計入cut off的計算。此時的cut off值的含義是代表該標誌物在健康(正常)人群中正常值範圍的上限。待檢樣本檢測值超過該上限(cut off)時表示有診斷意義。

例如抗—hbe、抗—hbc、抗—hbc igm等。

夾心法elisa的陰性對照、空白對照有何意義?

3樓:南京金益柏生物科技****

陰性值一般比較接近空白值,設定陰性對照,主要還是排除所加樣品裡有沒有其他物質對實驗干擾引起顯色,導致所測值偏高

4樓:小智

陰性對照即為空白對照,你們老師應該問的是陰性與陽性的意義吧?

定性實內驗加底物顯色後容,在白色背景上直接肉眼觀察結果。陰性對照孔應基本無色,陽性對照空呈藍色,若待測樣品空顏色深於陽性對照則其濃度大於陽性對照孔的濃度,若是顏色介於陰性與陽性之間則其濃度也應介於其間。(我們的實驗是對afp的檢測,其中陽性孔濃度為400ng/ml陰性為20ng/ml,正常人afp含量小於20ng/ml,在試驗中應該為陰性)

作空白試驗的目的 5

5樓:稜冉

空白試驗是指除不復加試樣外,

制採用完全相同的分析步驟、試劑和用量(滴定法中標準滴定液的用量除外),進行平行操作所得的結果。用於扣除試樣中試劑本底和計算檢驗方法的檢出限。

在檢測過程中,可能因為溶劑等等不同具體因素,每次測量值不同,但這並不說明測量不準確.所以要測量得到空白值,將實際測量值減掉空白值,才可以.

空白試驗值

空白試驗測得的結果稱為空白試驗值。在進行樣品分析時所得的值減去空白試驗值得到的最終分析結果。

空白試驗值反應了測試儀器的雜訊、試劑中的雜質、環境及操作過程中的沾汙等因素對樣品測定產生的綜合影響,直接關係到測定的最終結果的準確性。

空白試驗值低,資料離散程度小,分析結果的精度隨之提高,它表明分析方法和分析操作者的測試水平較高。當空白試驗值偏高時,應全面檢查試驗用水、試劑、量器和容器的沾汙情況、測量儀器的效能及試驗環境的狀態等,以便盡可能地降低空白試驗值。

夾心法elisa的陰性對照,空白對照有何意義

6樓:南京金益柏

陰性值一般比較接近空白值,設定陰性對照,主要還是排除所加樣品裡有沒有其他物質對實驗干擾引起顯色,導致所測值偏高

elisa 實驗注意事項知多少

elisa法為什麼每次實驗應做陽,陰性對照?

7樓:

你可以理解為它是系統適應性試驗的一部分。如果是定量elisa法的話一般專還要做高中低對照屬品。這些對照品是用來證明試驗是有效的,可信的。

舉個例子,如果你檢的樣品全是陰性,可能的原因是你忘加二抗了,怎麼排除這一原因呢?這就要看陽性對照,如果它是正常的,那麼說明沒有忘加。結果比較可信

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陰性對照的目的是排除假陽性,陰性對照就是乙個確定肯定已知是陰性的東西,如果結果出來這個樣本顯示陽性了,說明你的實驗有問題。陽性對照的目的是排除假陰性,陽性對照就是乙個確定肯定已知是陽性的東西,如果結果出來這個樣本測不出陽性反應,說明你的實驗有問題。空白有的時候可以當作是一種陰性對照。空白的特別意義在...

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