1樓:匿名使用者
螢光定量pcr法檢bai測的是sybr green摻入到雙du鏈dna中的量zhi。sybr green摻入到雙鏈dna中後會發出螢光。但dao是只要是雙鏈,回它都摻
答。而探針法是當探針結合到目標序列上以後,聚合酶降解探針後,探針上自帶的螢光基團離開淬滅基團,從而發出螢光。
從兩者的原理上來看,不難判斷,螢光pcr法更加簡單方便,而且成本低。而探針法特異性更強。
2樓:阿魯巴星人
螢光定量pcr法檢測的是sybr green摻入到雙鏈dna中的量。sybr green摻入到雙鏈dna中後會發出螢光。但是
版只要是雙鏈,它都權摻。
而探針法是當探針結合到目標序列上以後,聚合酶降解探針後,探針上自帶的螢光基團離開淬滅基團,從而發出螢光。
從兩者的原理上來看,不難判斷,螢光pcr法更加簡單方便,而且成本低。而探針法特異性更強。
pcr和實時螢光定量pcr這兩種有什麼區別
3樓:匿名使用者
實時螢光定量pcr技術,是指在pcr反應體系中加入螢光基團,利用螢光訊號積累實時監測整個pcr程序,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應)是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°c左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合,再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度(72°c左右),dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時螢光定量pcr的不同,是不同在實時螢光定量pcr的系統中加入了螢光染料(sybr green 或taqman 探針等等)。以sybr green為例,這種染料可以結合在雙鏈的dna上,當pcr不斷進行時,每一次退火生成的雙鏈dna也在增加,螢光染料結合也越多,螢光也越強。在機器中有乙個探測螢光的探頭,可以定量檢測螢光的強度,轉換成數值。
這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
螢光pcr更有優勢,因為螢光pcr靈敏度高於恆溫pcr,同樣**也高一些。
rt-pcr與螢光定量 pcr有什麼區別
4樓:朵向日葵熊
實時螢光定量pcr技術,是指在pcr反應體系中加入螢光基團,利用螢光訊號積累實時監測整個pcr程序,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應)是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°c左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合,再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度(72°c左右),dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時螢光定量pcr的不同,是不同在實時螢光定量pcr的系統中加入了螢光染料(sybr green 或taqman 探針等等)。以sybr green為例,這種染料可以結合在雙鏈的dna上,當pcr不斷進行時,每一次退火生成的雙鏈dna也在增加,螢光染料結合也越多,螢光也越強。在機器中有乙個探測螢光的探頭,可以定量檢測螢光的強度,轉換成數值。
這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
螢光pcr更有優勢,因為螢光pcr靈敏度高於恆溫pcr,同樣**也高一些。
實時螢光定量pcr與普通pcr的區別是什麼?結果有何異同?能說明的問題是什麼?
5樓:麼破1自我
二者結果相同。都能說明生物體外的特殊dna複製的整個過程的擴增效率和溶解溫度情況。
區別:1、二者系統組成不同
螢光定量pcr儀比普通的pcr儀多了螢光訊號採集系統和計算機分析處理系統。
2、二者原理不同
螢光定量pcr實時監測與dna結合的螢光染料激發的螢光,普通ocr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量。
3、二者反應要求不同
螢光定量pcr對擴增片段有較高的要求,一般為100-300bp,普通pcr可以擴增長點的片段。
4、二者應用不同
螢光定量pcr主要是用來定量分析和確定基因轉錄水平的,普通的pcr儀是做定性分析和擴增基因片段,定量pcr儀可以做普通pcr儀的工作,反之不行。
5、二者測量成本不同
定量pcr儀**較為昂貴,普通的基因擴增儀(pcr儀)只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是**要低很多,而且執行成本也要低很多。
實時螢光定量pcr技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的侷限,實現了每一輪迴圈均檢測一次螢光訊號的強度,並記錄在電腦軟體之中,通過對每個樣品ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。
6樓:匿名使用者
原理不同:螢光定量pcr實時監
測與dna結合的螢光染料激發的螢光;普通pcr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量,一般是紫外光。
反應要求:螢光定量對擴增片段有較高的要求,一般為100-300bp;普通定量可以擴增長點的片段。如果不需要檢測產物分子量大小,螢光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析,普通pcr必須電泳。
結果:螢光定量可以實現精確定量,普通pcr則不行。螢光定量體現可以看到整個擴增過程,可以看到擴增效率,溶解溫度,直接得到的標準曲線等,這些是普通pcr無法實現的。
如果還不清楚建議去丁香園等**逛逛,希望可以幫到你
7樓:匿名使用者
所謂實時螢光定量pcr技術,是指在pcr反應體系中加入螢光基團,利用螢光訊號積累實時監測整個pcr程序,最後通過標準曲線對未知模板進行「定量分析」的方法。
記住,實時螢光定量是定量分析
8樓:匿名使用者
螢光pcr是為了測量mrna表達量的 普通pcr是為了擴增目的片段的
9樓:匿名使用者
螢光定量是定量的,普通pcr是定性的,結果乙個是說明含有多少,另乙個說明有還是沒有,前者更精確一點
螢光定量pcr和實時螢光定量pcr還有反轉錄pcr都是什麼呀？有什麼區別，分別是什麼作用啊？謝謝啊
實時就是指每個階段的螢光都有收集，其實現在所有的螢光定量pcr儀器都是實時的。螢光定量pcr的英文簡寫是 fq pcr，f是螢光的縮寫，q是定量的縮寫。或者寫成是rt pcr。rt就是realtime的縮寫 做定量pcr的目的是為了了解起始模板數的量，這個一下寫不清楚，你看乙個說明書絕對看得懂。而反...
普通RTPCR與實時螢光定量PCR的引物有什麼區別
區別 如果rt pcr的擴增產物只有1,200bp，而且足夠保守可以定位螢光pcr的目的基因 那就可以通用 實時定量的引物設計要求比較高,可以按普通引物設計的方法來做,但是設計時要注意擴增的片段不能太大,最好在250bp 100bp之間.同時要保證這對引物有絕對的特異性,因為要是產生非特異性擴增的話...
螢光定量pcr的相對定量怎麼用,螢光定量PCR的相對定量怎麼用
管家基因是用來定量的。用來計算相對表達量。管家基因在相同量樣品中的表達量我們認為是一致的。然後根據這個量來計算你的基因在不同樣品中的表達量。所以每乙個都需要單獨的樣品。基因組干擾需要你在提取rna以後用dnase處理樣品。如果不放心，可以拿處理過的rna做膜版，跑一次，如果有帶就是有汙染，如果沒有可...