1樓：雲花夢
1.實驗材料必須準備充足。本實驗所用的實驗材料是雞血細胞液,由活雞的鮮血經沉澱後獲得。
每組(2個學生636f707962616964757a686964616f31333239313532)需用5 ml 雞血細胞液,則每班(50人)至少需要130 ml,而雞血細胞液與雞血的體積比為1:3,這樣每班至少需要390 ml 雞血細胞液。宰殺1只中等大小的活雞,一般可得120 ml 左右的鮮血,因此,1個班實驗需要買4只活雞。
如果不具備購買活雞的條件,也可以到市場售活雞處去索取雞血,但所帶燒杯中必須提前放入抗凝劑。
2.盛放雞血細胞液的容器,最好是塑料容器。雞血細胞破碎以後釋放出的dna,容易被玻璃容器吸附,由於細胞內dna的含量本來就比較少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的dna就會更少。
因此,實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程中dna的損失。
3.獲取較純淨的dna的關鍵步驟。
(1)充分攪拌雞血細胞液dna存在於雞血細胞的細胞核中。將雞血細胞液與蒸餾水混合以後,必須用玻璃棒沿乙個方向快速攪拌,使雞血細胞加速破裂,並釋放出dna。
(2)沉澱dna時必須用冷酒精實驗前必須準備好大量的體積分數為95%的酒精,並在冰箱(至少5s以下)中至少存放24 h。
(3)正確攪拌含有懸浮物的溶液實驗步驟3、5、7,都需要用玻璃棒攪拌。教師應提醒學生注意,在進行步驟3、5時,玻璃棒不要直插燒杯底部,而且攪拌要輕緩,以便獲得較完整的dna分子。進行步驟7時,要將玻璃棒插入燒杯中溶液的中間,用手緩慢轉動510 min。
三 參考資料
實驗原理的補充介紹
1.dna的釋放 dna位於雞血細胞的細胞核中,正常情況下不會釋放出來。為了使dna從細胞核中釋放出來,實驗中採用了向雞血細胞液中加入蒸餾水並且攪拌的方法。
蒸餾水對於雞血細胞來說,是一種低滲液體,水分可以大量進入血細胞內,使血細胞破裂。同時,再加上攪拌的機械作用,就加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂),於是釋放出dna,當然也有rna。但是,釋放出來的大量dna和rna往往與蛋白質結合在一起。
2.將dna與蛋白質分離 根據二者的特性,即在濃度較高的氯化鈉溶液(物質的量濃度為2 mol/l )中,核蛋白容易解聚,游離出dna。而dna在濃度較高的氯化鈉溶液中的溶解度很高,na+與帶負電的dna結合成dna鈉鹽。
這時dna在溶液中呈溶解狀態。
3.dna的析出與獲取 利用dna在濃度較低的氯化鈉溶液中溶解度小的原理,向含有dna的濃度較高的氯化鈉溶液中加入大量(300 ml )蒸餾水,稀釋氯化鈉溶液,使dna的溶解度下降,而蛋白質的溶解度增高(這就是蛋白質的鹽溶現象),從而使二者分離。這時,加上不停地攪拌,溶解度下降的dna逐漸呈絲狀物。
再通過過濾,濾去蛋白質,就可以獲取dna的黏稠物了。如果採用離心法則更好,用4 000 r/min 的旋轉頻率,離心15 min ,除去上清液(含有蛋白質),留下的沉澱物中含dna。
4.dna的再溶解 再用較高濃度的氯化鈉溶液去溶解dna黏稠物。
5.dna的沉澱和濃縮 除去了蛋白質的核酸溶液,必須再進一步沉澱和濃縮。最常用的方法是酒精沉澱法。
就是將含有na+的dna溶液,加入到相當於其兩倍體積的體積分數為95%冷酒精溶液中,混勻以後可以使dna沉澱、濃縮,形成含雜質較少的dna絲狀物,懸浮於溶液中。如果出現的絲狀物較少,可以將此混合液再放入冰箱中冷卻幾分。濃縮後的dna絲狀物,可以用緩緩旋轉玻璃棒的方法捲起(因為玻璃棒有吸附dna的作用)。
6.dna的鑑定 本實驗中鑑定dna的方法為二苯胺法(配方見下述的「藥品配製」)。二苯胺法的原理是:
dna中嘌呤核苷酸上的脫氧核糖遇酸生成ω-羥基-γ酮基戊醛,它再和二苯胺作用而顯現藍色(溶液呈淺藍色)。
鑑定時溶液藍色的深淺,與溶液中dna含量的多少有關。
二苯胺試劑的配製
a液： 15 g二苯胺溶於100 ml 冰醋酸中,再加15 ml濃硫酸,用棕色瓶儲存。如冰醋酸呈結晶狀態,則需加溫後待其熔化,再使用。
b液： 乙醛的體積分數為0.2%的溶液。
配製： 將0.1 ml b液加入到10 ml a液中,現配現用。
dna粗提取與鑑定的另一種方法
1.材料用具
新鮮菜花(或蒜黃、菠菜)。
塑料燒杯,量筒,玻璃棒,尼龍紗布,陶瓷研缽,試管,試管架,試管夾,漏斗,酒精燈,石棉網,三角架,火柴,刀片,天平。
研磨液,體積分數為95%的酒精溶液,二苯胺試劑,蒸餾水。
2.方法步驟
(1)dna的粗提取
①準備材料 將新鮮菜花和體積分數為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24 h。
②取材 稱取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 將碎菜花放入研缽中,倒入10 ml研磨液,充分研磨10 min 。
④過濾 在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學校可將濾液倒入塑料離心管中進行離心,用1 000r/min的旋轉頻率,離心25 min,取上清液放入燒杯中)。在4 ℃冰箱中放置幾分後,再取上清液。
⑤加冷酒精 將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數為95%的冷酒精溶液中,並用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉澱35 min後,可見白色的dna絮狀物出現。用玻璃棒緩緩旋轉,絮狀物會纏在玻璃棒上。
(2)dna的鑑定
①配製二苯胺試劑 取0.1 ml b液,滴入到10 ml a液中,混勻。
②鑑定 取4 ml dna提取液放入試管中,加入4 ml 二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100 ℃)加熱10 min 。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。
研磨液的配製方法
tris：10.1 g(相對分子質量為121.14),先加50 ml 蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2 mol/l 的鹽酸調至ph8.0,再加下述藥品。
nacl：8.76 g(相對分子質量58.44)
edta：37.2 g(相對分子質量372.24)
sds：20 g(相對分子質量288.3)
待上述藥品全部溶解後,再用蒸餾水定容至1 000 ml。
若在室溫低於20 ℃時配製藥液,sds呈沉澱析出,此時需要加溫,才能將sds溶解。如果提前配製的研磨液出現了沉澱,則應加溫使沉澱溶解後再使用。
研磨液中幾種藥品的作用
sds(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與dna分離。
edta(乙二胺四乙酸二鈉):為dna酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後dna酶降解dna。
物質的量濃度為0.15 mol/l的氯化鈉溶液：能很好地溶解dna。
tris/hcl：提供緩衝體系,dna在這個緩衝體系中呈穩定狀態。(tris為三羥甲基氨基甲烷)
鑑定dna的其他方法 用紫外燈照射法鑑定dna效果很好。具體鑑定方法如下。
1.配製染色劑。用蒸餾水配製萬分之五的溴化乙錠(eb)溶液。
2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹於蠟紙上,再滴1滴eb溶液染色。
3.將蠟紙放在紫外燈(260 nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的螢光(dna的紫外吸收高峰在280 nm處)。
高中生物問題（有關dna的實驗）
2樓：語數外和理化生
這個實驗應該是這bai樣做的：
du1.將雞血注入盛有檸檬zhi
酸鈉的燒杯中
dao,充分混合(以免凝血).然後將血液倒回入離心管內答離心,血細胞沉澱於離心管底部,用吸管除去離心管上部澄清液,即得到雞血細胞液.
2.向雞血細胞液中加入蒸餾水,快速攪拌,血細胞破裂.然後用用放有紗布的漏斗將血細胞液過濾,取濾液.
要用紗布過濾,不是濾紙.紗布的孔隙很大.則此時的濾液中含有dna.
3樓：匿名使用者
濾紙的孔徑相對較大
濾紙不是半透膜
同時dna也是大分子，不比蛋白質小
所以dna可以過濾紙，蛋白質一定可以過
過濾應該是濾去一些細胞的碎片和其他的雜質
dna是可以溶解在水中的
也是可以穿過濾紙的
4樓：shmily亮
濾紙是不具有選copy擇透過性~只是一般的半透膜了~
dna都溶解自然通過~過濾的只是大分子的東西~如蛋白質~
而且dna溶解度有關的只是nacl濃度~當nacl濃度=0.14g/ml時候dna溶解度最小~可以析出!
5樓：匿名使用者
(在雞血細胞液copy中加入了檸檬酸鈉bai溶液後，又加入蒸餾水，並du不斷攪拌，目zhi的是為了使dna盡快溶解dao在溶液中。)
首先你這句話就是錯的,加檸檬酸鈉是為了防凝,而加蒸餾水是使雞血細胞破裂釋放出dna,所以才(有然後再用單層濾紙過濾，這樣一些雜質就留在濾紙上，而dna會流過濾紙進入濾液中)。
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