1樓：涼了的
1、整個實驗過程均需置於冰上進行。
2、選用對數生長期細胞，od600在0.4~0.5間。
3、所有操作必須做到嚴格無菌，防止雜菌和雜dna的汙染。
4、動作不應太劇烈，減少細胞的機械損傷。
2樓：
保證感受態細胞的活性，所有操作盡量在冰上，暴露在空氣中的時間盡量短。
3樓：馮雨凝
1、整個實驗過程均需置於冰上進行。
2、選用對數生長期細胞，od600不應高於0.5。
感受態細胞製備過程中應注意什麼
4樓：阿魯巴星人
最重要的是控制菌的od值
選對正確的方法
一定要避免表面活性劑的存在和劇烈的**
避免高溫，最好全程低溫
注意避免雜菌汙染
一般就這幾條，注意了，感受態效率應該沒有問題。
感受態細胞的製備時有什麼注意事項
5樓：天寂無痕
1、培養溫度。較低的溫度培養有利於感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了 inoue 的高效感受態製備方法，它實際是利用了所有有利於感受態的文獻而得出的一
個非常理想方法。
2、在儲存感受態時，dmso 要比甘油的效果要好，它會使感受態的效率增加。
3、液氮速凍也會使感受態的效率提高，因此推薦用液氮速凍感受態，然後儲存於超低溫冰箱內。
4、凍存的感受態用一次拿一管，不要反覆凍融。化凍之後立即使用，不要冰上放太久。
5、操作時可以輕彈輕甩，盡量避免用移液器吹吸。
6樓：y神級第六人
（1）質粒dna的質量和濃度：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
（2）感受態細胞的質量：
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的，並用最純淨的水配製，最好分裝儲存於4℃
（3）細胞的生長狀態和密度
最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫公升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株，od600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同）。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
（二）感受態細胞轉化中的影響：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。
在製備感受態細胞的實驗中要注意哪些細節
7樓：du知道君
最重要的是控制菌的od值 選對正確的方法 一定要避免表面活性劑的存在和劇烈的** 避免高溫，最好全程低溫 注意避免雜菌汙染 一般就這幾條，注意了，感受態效率應該沒有問題。
大腸桿菌感受態細胞的製備要注意哪些因素
8樓：歷懷雨行茶
（1）質粒dna的質量和濃度：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
（2）感受態細胞的質量：
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的，並用最純淨的水配製，最好分裝儲存於4℃
（3）細胞的生長狀態和密度
最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫公升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株，od600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同）。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
（二）感受態細胞轉化中的影響：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。
cacl2法制感受態細胞：最近用此法製備感受態細胞，但是轉化後的效率很低，幾天看看平白機會乙個沒有長。
9樓：匿名使用者
首先要掌握好培養時間，細胞對數生長期的時候再做，一般od600為0.5左右。其次，在製備的時候要注意一定要整個過程都在冰上，保持低溫很重要，特別是離心過程，冷凍離心機要先預冷後再用。
實在不行試試冰浴水洗法吧，操作簡單而且電擊轉化效率很高的。
感受態細胞的轉化要注意些什麼
10樓：匿名使用者
注意事項：
1．實驗中所需氯化鈣於冰浴後再使用
2．使用離心機前，要嚴格保證離心物品充分平衡，以免造成離心機損傷3．大腸桿菌感受態一定放冰上溶化
4．熱激和冰浴時間要科學把握
11樓：匿名使用者
此外（1）質粒dna的質量和濃度，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，則會使轉化率下降;ml左右，且注意防止被其它試劑。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同），大於30kb的重組質粒將很難進行轉化：所用的cacl2等試劑均需是最高純度的。
對tg1菌株。所有的試劑都要滅菌。對於以質粒為載體的重組分子而言：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，並經高壓滅菌處理，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。一般地。細胞生長密度以每毫公升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳，所用器皿，並用最純淨的水配製，細胞密度在5×107個/：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，分子量大的轉化效率低，移液槍頭等最好是新的，不能離開冰浴，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，否則細胞轉化率將會降低，可通過測定培養液的od600控制、dna酶或雜dna所汙染，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比。密度過高或不足均會使轉化率下降。不要用已經過多次轉接。
（二）感受態細胞轉化中的影響。（2）感受態細胞的質量。整個操作均需在冰上進行，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，實驗證明，及貯存在4℃的培養菌液，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子，最好分裝儲存於4℃ （3）細胞的生長狀態和密度 最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入，od600為0．5時，如離心管
酵母感受態細胞的製備需要注意什麼
12樓：匿名使用者
酵母感受態細胞的製備
(1)從ypd平板上挑取乙個新鮮的釀酒酵母eby100單轉殖至10 mlypd液體培養基，30℃，250 rpm培養過夜；
(2)測定過夜培養物的od600值為3.0～5.0之間；
(3)將10 ml ypd過夜培養物稀釋至od600值為0.2～0.4；
(4)在28～30℃搖床中繼續培養3～6hr，使其od600值達到0.6～1.0；
(5)於室溫1500g離心5 min收集酵母細胞，棄上清；
用10ml洗液洗酵母細胞，隨後於室溫1500g離心5 min離心收集細胞，棄上清；
(7)用1 ml te/liac重懸酵母細胞，以每管50μl分裝。
酵母細胞的轉化
(1)取50μl感受態細胞，再加入待轉質粒各2μl，混勻；
(2)加入500μl 轉化用溶液（peg/liac,二甲亞碸），彈擊管壁混勻；
(3)30℃水浴1hr,隔15min彈擊管壁混勻；
(4)加入1毫公升ypd培養液，30℃搖床培養1小時
(5)3500g離心5 min ，留沉澱，棄上清；
沉澱用150μl te重懸，塗相應的sd平板；將平板倒置於30℃培養。
感受態細胞製備完成速凍後存放負20可以嗎
感受態細胞製備完成速凍後一般是負 80度或者液氮中凍存 如果不具備條件，負20度短時間儲存也可以。但是長時間儲存的話需要負80度或者液氮中儲存，並在培養液中加10 的dmso 所以感受態細胞製備完成速凍後暫時存放負20度是可以的，但是不能長期儲存 做好的感受態細胞在 80度能儲存多久呢？一般的細胞 ...
用氯化鈣怎樣製備新鮮的大腸桿菌感受態細胞
這屬於專業問題啦 下面的簡單方案是clhen等 1972 所用方法的變通方案，常用於成批製備感受態細菌，這些細菌可使每微克螺旋質粒dna產生5x106 2x107 個轉化菌落，這樣的轉化效率足以滿足所有在質粒中進行的常規轉殖的需要。該方法完全適用於大多數大腸桿菌菌株，並且比方案i快速，重複性更好。該...
把DNA加入感受態細胞時產生泡沫有什麼影響
沒有什麼影響,放心做下去吧 就是不要吹打,輕輕攪一下就好了 因為感受態比較脆弱，吹打會殺死它們。由於鈣等離子附著在細胞膜上，形成液晶狀態，所以細胞膜會變得很脆弱，在轉化復甦之前，都要輕輕地操作 影響感受態細胞製備的因素有哪些 1 細菌的生長狀態 實驗中應密切注視細菌的生長狀態和密度，盡量使用對數生長...