為什麼要進行亞轉殖?基因已經轉殖到T載體上了,想表達它

2021-03-03 20:55:52 字數 3059 閱讀 8625

1樓:匿名使用者

t載體一般是轉殖載體,需要轉殖到表達載體,用相應的啟動子啟動表達

2樓:

t載體不是表達載體。

直接轉殖和亞轉殖的區別

3樓:海灘的風鈴

亞轉殖是轉殖的成果中進行在培養的過程。兩者區別在於亞轉殖為內轉殖的再選擇過程。

轉殖容是英文"clone"或"cloning"的音譯,而英文"clone"則起源於希臘文"klone",原意是指以幼苗或嫩枝插條,以無性繁殖或營養繁殖的方式培育植物,如扦插和嫁接。

亞轉殖:(subclone) 分為細胞轉殖和分子轉殖。

在細胞轉殖中,對培養的細胞來說,從原有的轉殖中,再篩選出具有某種特性的細胞進行培養,就是亞轉殖。

在分子轉殖中,從大片段的轉殖中選取特定小片段再轉殖。

亞轉殖就是初步轉殖的外源片段往往較長,含有許多目的基因片段以外的dn**段,將目的基因所對應的一小段dna找出來。

對已經獲得的目的dn**段進行重新轉殖,其目的在於對目的dna進行進一步分析,或者進行重組改造等。

亞轉殖的基本過程包括:

(1)目的dn**段和載體的製備;

(2)目的dn**段和載體的連線;

(3)連線產物的轉化;

(4)重組子篩選。

我要把乙個基因分段亞轉殖,並進行表達,表達出的產物能有功能嗎?

4樓:冬月芳

如果該蛋白只含乙個亞基,那你把它分段後它不能形成有功能的蛋白;如果是由多個亞基組成的,你要保證它是各個亞基基因分開轉殖,那它們結合形成有功能的蛋白是自發的還是需要刺激?這個你也要考慮。所以如果是隨機分段的話,表達出來的產物應該是沒有功能的

5樓:佰草集

根據亞基、結構域分段轉殖。有沒有功能不好說要看表達出的蛋白的活性部位的空間構象有沒有受影響

轉殖載體在生物體內的表達蛋白的量小,為什麼有的實驗,還將含有目的基因的轉殖載體,直接打入生物體內

6樓:士誠小人也

轉殖載體,顧名思義,主要是用來做轉殖或者亞轉殖的,也可以用於測序目的,很少用於表達

它與表達載體的主要區別,在於缺少強啟動子

我有乙個基因片段老是正向連線到pmd18-t載體上,我現在想要它反向連線上去,有什麼好的方法嗎?

7樓:匿名使用者

在插入序列2端用pcr連線上不同的酶切位點(和載體的位置相對),用酶處理pcr產物和載體,然後再連線就可以了。

8樓:匿名使用者

要麼你像樓上說的那樣,做定向轉殖;我想你的本意就是要避免換個引物再亞轉殖一次,所以你

內只能多篩一些轉殖容,可以用 m13f+你特異基因的f引物 批量做菌落pcr驗證(或m13r+特異基因的r),擴出條帶就是反向插入了。如果p了上百個轉殖還 沒有,勸你放棄吧,還是定向轉殖吧。

好多基因已有註釋,為什麼還做race

9樓:匿名使用者

現在全基因組測序用鳥槍法,把所有dna打碎成短片段,測出所有片段的序列再用超級計算機進行拼接。你說的是老方法,先構建大的長片段文庫,這些長片段互相重疊,能涵蓋全部基因組,即所謂的骨架scaffold。然後在對文庫裡每乙個轉殖進行亞轉殖,應該還進行亞亞轉殖,得到可以直接測序的短片段轉殖,即所謂的可以測序得到reads的轉殖。

每個reads的序列拼接起來,逐級拼接,最後得出每乙個長片段轉殖的序列,最後進行長片段轉殖的拼接,得到每一條染色體的序列。實際上老方法就是分級轉殖,再拼接,鳥槍法就是直接得到短片段,不經過轉殖,對短片段直接測序、拼接。人類基因組計畫最初使用老方法,後來乙個公司使用了鳥槍法,最後兩種方法同時完成。

10樓:琴厚縱清秋

如果你想要全長cdna的話,就需要做race。如果只是想要編碼段,可以不用做race,poly-dt反轉錄後直接設計特異性引物把cds區段pcr擴增出來,連線進載體即可。

pgem- t easy載體的目的就是為了使以後的亞轉殖更成功麼?謝謝

11樓:_然然

不知道你

抄的這個問題,以我

襲的經驗回答下吧。我的是pcr產物膠**後連線的t easy載體,轉化轉殖,送去測序。因為pcr兩頭保真性低所以連t載體轉殖,有的t載體是帶有多轉殖位點區的,而t easy載體沒有,為了不妨礙自己的後續酶切選了t easy載體。

不知道能幫到你嗎?

關於質粒亞轉殖的一些問題

12樓:匿名使用者

一般實驗室常用的載體,都是用固定的常用雙酶切切割後將基因連進去的,所以你可以資訊師兄是用什麼內切酶位點構建的。

13樓:匿名使用者

想不pcr直接酶切,除看是否有相同的酶切位點之外,還得看兩載體相同酶切位點之間讀碼框是不是一樣。

如何區分組織中的轉殖突變和亞轉殖突變

14樓:匿名使用者

亞轉殖是轉殖的成果中進行在培養的過程。兩者區別在於亞轉殖為轉殖的再選擇過程。

轉殖是英文"clone"或"cloning"的音譯,而英文"clone"則起源於希臘文"klone",原意是指以幼苗或嫩枝插條,以無性繁殖或營養繁殖的方式培育植物,如扦插和嫁接。

亞轉殖:(subclone) 分為細胞轉殖和分子轉殖。

在細胞轉殖中,對培養的細胞來說,從原有的轉殖中,再篩選出具有某種特性的細胞進行培養,就是亞轉殖。

在分子轉殖中,從大片段的轉殖中選取特定小片段再轉殖。

亞轉殖就是初步轉殖的外源片段往往較長,含有許多目的基因片段以外的dn**段,將目的基因所對應的一小段dna找出來。

對已經獲得的目的dn**段進行重新轉殖,其目的在於對目的dna進行進一步分析,或者進行重組改造等。

亞轉殖的基本過程包括:

(1)目的dn**段和載體的製備;

(2)目的dn**段和載體的連線;

(3)連線產物的轉化;

(4)重組子篩選。

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