暑假我想使用植物組織培養技術,你知道它詳細的操作過程嗎

2021-05-04 04:22:23 字數 5111 閱讀 3319

1樓:貓魚風鈴

植物組織培養的大致過程是:在無菌條件下,將植物器官或組織(如芽、莖尖、根尖或花藥)的一部分切下來,用纖維素酶與果膠酶處理用以去掉細胞壁,使之露出原生質體,然後放在適當的人工培養基上進行培養,這些器官或組織就會進行細胞**,形成新的組織。不過這種組織沒有發生分化,只是一團薄壁細胞,叫做愈傷組織。

在適合的光照、溫度和一定的營養物質與激素等條件下,愈傷組織便開始分化,產生出植物的各種器官和組織,進而發育成一棵完整的植株。

大概總結為 取材→去壁→脫分化→再分化→培養。

問題是樓主有這些植物組培的條件麼。。。再說李子樹那麼大,一般高達8公尺。純粹實驗室內培養肯定不夠,樓主要把它先培養成樹苗再移植到室外土壤中才行。。

還有加上李子樹從生長到成熟結果也要一段時間。。。暑假是不夠的。。。樓主先用蘿蔔塊試一試吧。。。

2樓:匿名使用者

植物組織培養的步驟

一、培養基配製

現以ms培養基為例介紹配置培養基的主要過程。

1、配製幾種母液

(1)配製ms大量元素母液   一般將大量元素分別配製成100倍的母液,使用時再分別稀釋100倍。   分別稱取   nh4no3 165g kh2po4 17g   kno3 190g cacl2·2h2o 44g   mgso4·7h2o 37g   各自配成1l的母液。倒入1l試劑瓶中,存放於冰箱中。

  (2)配製ms微量元素母液   一般將微量元素配製成100倍母液。   依次稱取   ki 0.083g na2moo4·2h2o 0.

025g   h3bo3 0.62g cuso4·5h2o 0.0025g   mnso4·h2o 1.

69g cocl2·6h2o 0.0025g   znso4·7h2o 0.86g   配成1l母液,倒入1l試劑瓶中,存放於冰箱中。

  cuso4·5h2o和cocl2·6h2o 由於稱取量很小,如果天平精確度沒有達到萬分之一,可先配成調整液。   分別稱取   cuso4·5h2o 0.05g cocl2·6h2o 0.

05g   各自配成100ml的調整液,然後取5ml就還有0.0025g的量。

(3)配製ms有機母液   一般配製成100倍ms有機母液。   依次稱取   肌醇 10g 鹽酸硫胺素(vb1) 0.01g   煙酸 0.

05g 甘氨酸 0.2g   鹽酸吡哆醇(vb6) 0.05g   配成1l母液,倒入1l試劑瓶中,存放於冰箱中。

(4)配製ms鐵鹽母液   一般配製成100倍ms鐵鹽母液。   依次稱取   edta二鈉 3.73g feso4·7h2o 2.

78g   配成1l母液,倒入1l試劑瓶中,存放於冰箱中。   所以ms母液有5種大量元素母液,加上ms微量元素母液、ms有機母液和ms鐵鹽母液,共8種母液。   激素母液的配製   各種生長素和細胞**素要單獨配製,不能混合在一起,生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當量的naoh溶解,細胞**素一般要先用1當量的鹽酸溶解,然後再加蒸餾水定容。

一般取100mg配成100ml母液。

2、配製培養基   以配置1l ms培養基為例,按順序進行如下操作:

(1)先在燒杯中放入一些蒸餾水。   (2)分別取上面八種母液10ml倒入。   (3)一般稱取30g蔗糖倒入,攪拌溶解。

  (4)加蒸餾水用量筒定溶至1l。   (5)按設計好的方案新增各種激素,由於激素的用量很小,而且激素對組培植物的生長至關重要。所以有條件的話最好用微量可調移液器吸取,減少誤差。

  (6)用精密試紙或酸度計調整ph至5.7-5.8。

(有條件的話使用酸度計,比較精確) 可配1當量的hcl和1當量的naoh用來調溶液ph值。   1當量hcl配製:用量筒量取8.

3ml配成100ml溶液。   1當量naoh配製:稱取naoh 4g 配成100ml溶液。

  (7)稱取5g左右瓊脂粉(***的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在電爐上加熱至沸騰,直到瓊脂粉熔化。   (8)稍微冷卻後,分裝入培養容器中。無蓋的培養容器要用封口膜或牛皮紙封口,用橡皮筋或繩子紮緊。

  (9)放入消毒滅菌鍋滅菌,滅菌20分鐘左右。   (10)滅菌後從滅菌鍋中取出培養基,平放在實驗台上令其冷卻凝固。

二、滅菌

滅菌是組織培養重要的工作之一。

1、培養基用濕熱滅菌   培養基在製備後的24小時內完成滅菌工序。高壓滅菌的原理是:在密閉的蒸鍋內,其中的蒸汽不能外溢,壓力不斷上公升,使水的沸點不斷提高,從而鍋內溫度也隨之增加。

在0.1mpa的壓力下,鍋內溫度達121℃。在此蒸汽溫度下,可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。

  注意完全排除鍋內空氣,使鍋內全部是水蒸氣,滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法,但目的都是要排淨空氣,使鍋內均勻公升溫,保證滅菌徹底。常用方法是:

關閉放氣閥,通電後,待壓力上公升到0.05mpa時,開啟放氣閥,放出空氣,待壓力錶指標歸零後,再關閉放氣閥。   關閥再通電後,壓力錶上公升達到0.

1mpa時,開始計時,維持壓力0.1-0.15mpa,20分鐘。

  按容器大小不同,保壓時間有所不同,見表。該表所列數字是徹底滅菌很保險的數字,如果容器體積較大,但是放置的數量很少,也可以減少時間。

三、接種

無菌操作可按以下步驟進行:   (1)在接種4小時前用甲醛燻蒸接種室,並開啟其內紫外線燈進行殺菌;   (2)在接種前20分鐘,開啟超淨工作台的風機以及台上的紫外線燈;   (3)接種員先洗淨雙手,在緩衝間換好專用實驗服,並換穿拖鞋等;   (4)上工作台後,用酒精棉球搽拭雙手,特別是指甲處。然後搽拭工作檯面;   (5)先用酒精棉球搽拭接種工具,再將鑷子和剪刀從頭至尾過火一遍,然後反覆過火尖端處,對培養皿要過火烤乾;   (6)接種時,接種員雙手不能離開工作台,不能說話、走動和咳嗽等;   (7)接種完畢後要清理乾淨工作台,可用紫外線燈滅菌30分鐘,若連續接種,每5天要大強度滅菌一次。

  接種是將已消毒好的根、莖、葉等離體器官,經切割或剪裁成小段或小塊,放入培養基的過程。現將接種前後的程式連貫地介紹。

無菌接種步驟:   (1)將初步洗滌及切割的材料放入燒杯,帶入超淨台上,用消毒劑滅菌,再用無菌水沖洗,最後瀝去水分,取出放置在滅過菌的紗布上或濾紙上。   (2)材料吸乾後,一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀,對材料進行適當的切割。

如葉片切成0.5cm平方的小塊;莖切成含有乙個節的小段。微莖尖要剝成只含1-2片幼葉的莖尖大小等。

在接種過程中要經常灼燒接種器械,防止交叉汙染。   (3)用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養基上。具體操作過程(以試管為例)是:

先解開包口紙,將試管幾乎水平拿著,使試管口靠近酒精燈火焰,並將管口在火焰上方轉動,使管口裡外灼燒數秒鐘。若用棉塞蓋口,可先在管口外面灼燒,去掉棉塞,再燒管口裡面。然後用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內,輕輕插入培養基上。

若是葉片直接附在培養基上,以放1-3塊為宜。至於材料放置方法除莖尖、莖段要正放(尖端向上)外,其他尚無統一要求。接種完後,將管口在火焰上再灼燒數秒種。

並用棉塞,塞好後,包上包口紙,包口紙裡面也要過火。

四、培養

1、培養方法   (1)固體培養法   即用瓊脂固化培養基來培養植物材料的方法。是現在最常用的方法。雖然該方法裝置簡單,易行,但養分分布不均,生長速度不均衡,並常有褐化中毒現象發生。

  (2)液體培養法   即用不加固化劑的液體培養基培養植物材料的方法。由於液體中氧氣含量較少,所以通常需要通過攪動或振動培養液的方法以確保氧氣的供給,採用往復式搖床或旋轉式搖床進行培養,其速度一般為50-100r/min,這種定期浸沒的方法,既能使培養基均一,又能保證氧氣的供給。

2、培養步驟   (1)初代培養   初代培養旨在獲得無菌材料和無性繁殖系。即接種某些外植體後,最初的幾代培養。初代培養時,常用誘導或分化培養基,即培養基中含有較多的細胞**素和少量的生長素。

初代培養建立的無性繁殖系包括:莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。

五、馴化移栽

試管苗移栽是組織培養過程的重要環節,這個工作環節做不好,就會造成前功盡棄。為了做好試管苗的移栽,應該選擇合適的基質,並配合以相應的管理措施,才能確保整個組織培養工作的順利完成。     1、移栽用基質和容器     (1)河砂     (2)草炭土    (3)腐殖土  (4)容器      2、移栽前的準備   移栽前可將培養物不開口移到自然光照下鍛鍊2-3天,讓試管苗接受強光的照射,使其長得壯實起來,然後再開口練苗1-2天,經受較低濕度的處理,以適應將來自然濕度的條件。

  3、移栽和幼苗的管理   從試管中取出髮根的小苗,用自來水洗掉根部粘著的培養基,要全部除去,以防殘留培養基滋生雜菌。但要輕輕除去,應避免造成傷根。移植時用乙個筷子粗的竹籤在基質中插一小孔,然後將小苗插入,注意幼苗較嫩,防止弄傷,栽後把苗周圍基質壓實,栽前基質要澆透水。

栽後輕澆薄水。再將苗移入高濕度的環境中。保證空氣濕度達90%以上。

  (1)保持小苗的水分供需平衡。在移栽後5-7天內,應給予較高的空氣濕度條件,使葉面的水分蒸發減少,盡量接近培養瓶的條件,讓小苗始終保持挺拔的狀態。保持小苗水分供需平衡首先營養缽的培養基質要澆透水,所放置的床面也要澆濕,然後搭設小拱棚,以減少水分的餓蒸發,並且初期要常噴霧處理,保持拱棚薄膜上有水珠出現。

當5-7天後,發現小苗有生長趨勢,可逐漸降低濕度,減少噴水次數,將拱棚兩端開啟通風,使小苗適應濕度較小的條件。約15天以後揭去拱棚的薄膜,並給予水分控制,逐漸減少澆水,促進小苗長得粗壯。   (2)防止菌類滋生。

由於試管苗原來的環境是無菌的,移出來以後難以保持完全無菌,因此,應盡量不使菌類大量滋生,以利成活。所以應對基質進行高壓滅菌或鴻烤滅菌。可以適當使用一定濃度的殺菌劑以便有效的保護幼苗,如多菌靈、托布津,濃度800-1000倍,噴藥宜7-10天一次。

在移苗時盡量少傷苗,傷口過多,根損傷過多,都是造成死苗的原因。噴水時可加入0.1%的尿素,或用1/2ms大量元素的水溶液作追肥,可加快苗的生長與成活。

  (3)一定的溫、光條件。 試管苗移栽以後要保持一定的溫光條件,適宜的生根溫度是18-20℃,冬春季地溫較低時,可用電**來加溫。溫度過低會使幼苗生長遲緩,或不易成活。

溫度過高會使水分蒸發,從而使水分平衡受到破壞,並會促使菌類滋生。   另外在光照管理的初期可用較弱的光照,如在小拱棚上加蓋遮陽網或報紙等,以防陽光灼傷小苗和增加水分的蒸發。當小植株有了新的生長時,逐漸加強光照,後期可直接利用自然光照。

促進光合產物的積累,增強抗性,促其成活。   (4)保持基質適當的通氣性。 要選擇適當的顆粒狀基質,保證良好的通氣作用。

在管理過程中不要澆水過多,過多的水應迅速瀝除,以利根系呼吸。   綜上所述,試管苗在移栽的過程中,只要把水分平衡、適宜的介質、控制雜菌和適宜的光、溫條件控制好,試管苗是很容易移栽的。

什麼是植物組織培養技術,植物細胞培養技術和植物組織培養技術的區別

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