細菌的常用染色技術,細菌有哪些染色方法?

2022-11-02 23:05:04 字數 5169 閱讀 9746

1樓:八欲饕餮

簡單染色法:利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。例如番紅。

1.塗片:用灼燒滅菌冷卻後的接種環挑取少量菌體與水滴充分混勻,塗成極薄的菌膜。

2.乾燥:可自然晾乾,或將塗片置於火焰高處微熱烘乾,但不能直接在火焰上烘烤。

3.固定:手執玻片一端,有菌膜的一面朝上,通過迅速通過火焰2-3次(用手指觸塗片反面,以不燙手為宜)。

4.染色:加適量(以蓋滿菌膜為度)結晶紫染色液(或石炭酸復紅液),染l~2min。

5.水洗:用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止。

6.乾燥

7.鏡檢

復染色:利用用兩種以上染料對細菌進行染色。例如革蘭氏染色法。

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,需要鹼性染料(basic dye)初染液;媒染劑(mordant);脫色劑(decolorising agent)和復染液(counterstain)。

鹼性染料初染液的象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣,而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫(crystal violet)。媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使不易脫落,碘(iodine )是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同型別的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95%的酒精(ethanol)。

復染液也是一種鹼性染料,其顏色不同於初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,而且將細胞區分成g+和g-兩大類群,常用的復染液為番紅。

1.載玻片固定。在無菌操作條件下,用接種環挑取少量細菌於乾淨的載玻片上塗佈均勻,在火焰上加熱以殺死菌種並使其粘附固定。

2.草酸銨結晶紫染1分鐘。

3.自來水沖洗,去掉浮色。

4.用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘,傾去多餘溶液。

5.用中性脫色劑如乙醇(95%)或丙酮酸脫色30秒,革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色,革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色。

6.用番紅染液或者沙黃復染30秒,革蘭氏陽性菌仍呈紫色,革蘭氏陰性菌則呈現紅色。

2樓:匿名使用者

1、常用的染色:簡單染色、革蘭氏染色;

2、特殊染色:芽孢染色、鞭毛染色等。

3樓:德里扎

簡單染色;負染色;g+g-染色(革蘭氏)

細菌有哪些染色方法?

4樓:雙藹梅冷萱

1革蘭氏染色法

是最常用的鑑別染色法之一。此法起始2023年,染色步驟是先用結晶紫或龍膽紫染液加於已固定好的標本上使之著色,其後加碘液作媒染劑,再用酒精脫色,最後用復紅或沙黃復染。革蘭氏染色的結果與培養基成分、培養條件及操作技術等有密切關係。

如塗片太厚影響酒精脫色,革蘭氏陰性菌則可染成革蘭氏陽性菌。脫色時若酒精作用時間太長,

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,革蘭氏陽性菌又會染成革蘭氏陰性菌。在缺乏鎂鹽的培養基中,革蘭氏陽性菌可變成革蘭氏陰性菌。菌齡也能影響染色的結果,這與生長過程中核酸含量的改變有關。

革蘭氏染色法的原理還不十分清楚,有化學學說、等電點學說、滲透性學法,目前最通常的解釋是革蘭氏陽性菌在95%酒精中因含粘肽多而導致細胞壁脫水,通透性減低,使在細菌細胞內著色的染料─碘複合物不易透出細胞壁,所以保留了紫色;革蘭氏陰性菌含粘肽少,其細胞壁在95%酒精作用下通透性變化不大,酒精容易進入菌體內溶解染料─碘複合物而透出,失去紫色後被復染成為紅色。

2抗酸染色法

有些細菌,如結核桿菌,不般不易著色,一旦染上色後又不易被鹽酸酒精脫色,稱為抗酸菌。主要步驟是將細菌塗片、乾燥、固定後,以石炭酸復紅染液加溫進行染色,然後用含酸的酒精脫色,最後用美藍復染。一般細菌以及標本中的物質都被脫色,抗酸菌則不能,仍為紅色。

在藍色背景上呈紅色的細菌即為抗酸菌。

3細菌特殊結構的染色法

細菌的特殊結構,如鞭毛、莢膜、細胞壁、芽孢及異染顆粒等,用普通染色法不易著色,故需用特殊染色法。

4負染色法

是指背景著色而細菌本身不著色。常用墨汁負染色法配合單染色法(如美藍)檢查細菌的莢膜,背景呈黑色,菌體染成藍色,

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,莢膜不著色,包繞在菌體周圍,成為一層透明的空圈。

5螢光染色法

用螢光染料,如金胺、吖啶橙等進行染色。細菌用螢光染料著色後在螢光顯微鏡下檢查,可在黑的背景中觀察到細菌發出明亮的螢光。用螢光染色法檢查細菌,有加快檢查速度和提高陽性率等優點。求採納

5樓:生命的步履

一、常用的染色方法有革蘭氏染色(最基本)、芽孢染色、莢膜染色、鞭毛染色等。

二、.1 革蘭染色法 (1)取含金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液塗片、乾燥、固定;(2)染色:用結晶紫染液染1min,水沖洗;盧戈碘液染1min,水沖洗;0.

4%復紅酒精溶液染30s,水沖洗;(3)吸乾後鏡檢[2] 。

1.2 抗酸染色法 (1)取結核桿菌陽性的痰標本(已處理)塗片、乾燥、固定。(2)染色:

將石炭酸復紅染液沸水浴10min,滴加2~3滴覆蓋菌膜染色 5min,水沖洗,3%鹽酸酒精脫色30s,水沖洗;鹼性美蘭復染30s,水沖洗。(3)吸乾後鏡檢[3] 。

1.3 莢膜染色法 (1)取接種肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液塗片、乾燥、固定;(2)染色:用石炭酸復紅染液染1min,水沖洗;95%酒精脫色5s水沖洗;20%鞣酸溶液媒染10min水沖洗;0.

8%孔雀綠溶液染色1min,水沖洗;(3)吸乾後鏡檢[4] 。

1.4 芽胞染色法 (1)取等量破傷風桿菌厭氧培養菌液和5%孔雀綠水溶液,放入小試管中充分混合,沸水浴20min;取上述混合液塗片、乾燥、固定;(2)用 1%沙黃液復染10min,水沖洗;(3)乾後鏡檢。

2.1 革蘭染色 鏡下,金黃色葡萄球菌染成紫色、球形,為革蘭陽性菌;大腸埃希菌染成紅色、桿狀,為革蘭陰性菌。革蘭染色法是細菌學中最經典,應用最廣泛的染色法之一。

脫色是影響革蘭染色的關鍵步驟,脫色時間長短直接關係到染色結果的準確性[5] 。脫色過度則革蘭陽性菌可能被誤染為革蘭陰性菌,脫色不 夠則革蘭陰性菌可能被誤染為革蘭陽性菌,為此學生難以把握。現將原有四步染色法改為三步法,即把第三步酒精脫色和第四步復紅復染合併一步進行,使用 0.

4%復紅酒精溶液作為復染劑,可達到脫色和復染雙重目的。這樣,就可以避免學生在四步法中因脫色時間不易掌握而造成染色的失敗,減少重複性實驗,提高了教學效果。

2.2 抗酸染色 鏡下,結核分枝桿菌染成紅色,為抗酸菌;背景和其他菌被染成藍色,為非抗酸菌。傳統的方法是滴加石炭酸復紅染液於塗片上,用玻片夾夾住塗片以微火菸葉熱,保持染液冒蒸汽約5min,此法學生容易使染液蒸乾或使染液沸騰,從而影響染色效果和汙染環境。

改良後的方法是將染液直接加熱改為水浴後使用,克服上述的缺點,且染色效果良好。適合實驗教學使用。

2.3 莢膜染色 鏡下,肺炎球菌菌體染成紅色(成雙排列),莢膜染成綠色,存在於菌體的周圍。傳統的莢膜染色是用結晶紫染液染色,菌體染成紫色,莢膜染成淡紫色或無色,菌體和莢膜之間反差小,不易分辨。

改良後,增加了脫色、媒染、復染的步驟,使菌體和莢膜之間反差增大,易於觀察,可用於學生實驗和示教片的製作。

2.4 芽胞染色 鏡下,破傷風桿菌的菌體染成紅色,芽胞染成綠色。傳統的方法是滴加石炭酸復紅染液於塗片上並弱火加熱,使染液冒蒸汽約5min,此法染液用量大,且容易汙染衣物和實驗臺。

現改為菌液和染液混合水浴加熱初染,然後製備塗片、固定、復染,即節約時間,染液消耗又少,且菌體、芽胞對比鮮明。此法適用於教學標本片的製作。

三、簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。

操作步驟

1.塗片:用灼燒滅菌冷卻後的接種環挑取少量菌體與水滴充分混勻,塗成極薄的菌膜。

2.乾燥:可自然晾乾,或將塗片置於火焰高處微熱烘乾,但不能直接在火焰上烘烤。

3.固定:手執玻片一端,有菌膜的一面朝上,通過迅速通過火焰2-3次(用手指觸塗片反面,以不燙手為宜)。

4.染色:加適量(以蓋滿菌膜為度)結晶紫染色液(或石炭酸復紅液),染l~2min。

5.水洗:用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止。

6.乾燥

7.鏡檢

細菌的形態鑑別染色法最常用的是什麼

6樓:匿名使用者

細菌的形態鑑別染色法最常用的方法如下:

7樓:匿名使用者

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細菌細胞染色的方式有哪幾種各有什麼作用

8樓:北京索萊寶生物

簡單染色法:利用單一染料對細菌進行染色的一種方法.例如番紅.

1.塗片:用灼燒滅菌冷卻後的接種環挑取少量菌體與水滴充分混勻,塗成極薄的菌膜.

2.乾燥:可自然晾乾,或將塗片置於火焰高處微熱烘乾,但不能直接在火焰上烘烤.

3.固定:手執玻片一端,有菌膜的一面朝上,通過迅速通過火焰2-3次(用手指觸塗片反面,以不燙手為宜).

4.染色:加適量(以蓋滿菌膜為度)結晶紫染色液(或石炭酸復紅液),染l~2min.

5.水洗:用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止.

6.乾燥

7.鏡檢

復染色:利用用兩種以上染料對細菌進行染色.例如革蘭氏染色法.

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,需要鹼性染料(basic dye)初染液;媒染劑(mordant);脫色劑(decolorising agent)和復染液(counterstain).

鹼性染料初染液的象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣,而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫(crystal violet).媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使不易脫落,碘(iodine )是常用的媒染劑.脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同型別的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95%的酒精(ethanol).

復染液也是一種鹼性染料,其顏色不同於初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,而且將細胞區分成g+和g-兩大類群,常用的復染液為番紅.

1.載玻片固定.在無菌操作條件下,用接種環挑取少量細菌於乾淨的載玻片上塗佈均勻,在火焰上加熱以殺死菌種並使其粘附固定.

2.草酸銨結晶紫染1分鐘.

3.自來水沖洗,去掉浮色.

4.用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘,傾去多餘溶液.

5.用中性脫色劑如乙醇(95%)或丙酮酸脫色30秒,革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色,革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色.

6.用番紅染液或者沙黃復染30秒,革蘭氏陽性菌仍呈紫色,革蘭氏陰性菌則呈現紅色.

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