流式細胞儀檢測細胞週期直方圖怎樣建立

2021-03-04 08:53:59 字數 2633 閱讀 5213

1樓:匿名使用者

對於pi單染的細胞週期,只需要乙個直方圖,而對於brdu/edu+pi雙染的,只要做散點圖。沒有哪個需要四個直方圖的。

你問的到底是什麼?貼個圖來看看,會比較明白

流式細胞儀測細胞週期圖怎樣分析

2樓:瀟灑的熱心網友

(1)細胞

培養bai

取對數生長du

期的細胞,按1x106個/ml以1ml體積zhi接種dao於6孔板內

。培養24h後,加入版不權同濃度樣品。在37 ℃、5 % 的co2恆溫箱中培養24h後終止。

(2)細胞固定

胰酶消化並離心收集細胞(800rpm/min),棄上清,用預冷pbs洗細胞兩次,加入預冷70%乙醇, -20℃固定儲存。

(3) 細胞染色

離心收集細胞(800rpm/min),以1ml的pbs洗細胞一次,加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙錠(pi),100ug/ml rnase a, 4℃避光孵育20分鐘。

(4)檢測

以標準程式用流式細胞儀檢測,汞激發波長488nm,計數8千個細胞,結果用軟體winmdi version 2.9分析。

流式細胞儀檢測細胞週期圖怎麼看

3樓:匿名使用者

這個要根據是dna單染還是dna+核苷酸模擬物雙染來區別。你的圖呢?

流式細胞儀測定細胞週期各時相的原理和基本步驟(不用說具體使用的量)

4樓:匿名使用者

在細胞培養液中加入模擬核苷酸edu (比較老的方法也可以用brdu)。培養一小時 後,更換為正常的培養液繼續培養。模擬核苷酸可以像天然核苷酸一樣被細胞攝取並整合入新合成的dna。

培養一段時間後(一般小於乙個細胞週期),固定細胞。根據所使用模擬核苷酸的不同,使用不同的方法。edu,改變緩衝液的ph值,就會發出螢光。

而brdu則需用螢光抗體識別,需要對細胞膜和核膜進行通透處理。

再加入pi對dna染色。

在二維座標圖上,橫座標設為線性pi螢光強度,縱座標設為模擬核苷酸的螢光強度(log)。

典型的圖就像下面一樣:

g1, g2 和s期就按照圖中的劃分來做。g1期的細胞沒有新合成dna,所以brdu訊號是陰性,而pi的訊號位於1倍體期。s期是正在合成dna,所以brdu都是陽性。

g2期是已經合成好了2倍的dna,所以位於2倍體期,訊號是g1期的一倍。這個圖中,g1 pi訊號是300, g2就是600.

流式細胞儀直方圖**

5樓:匿名使用者

這不是流式的圖。你看橫座標表示的是螢光強度,縱座標是標準化後的畫素的計數。是對左側細胞螢光顯微鏡影象的定量。

兩個峰分別代表的是兩種螢光的強度分布。有顏色的那個影象是2種螢光人工疊加的效果圖。

6樓:匿名使用者

這似乎不是流式細胞的圖。縱軸是normalized pixel count,似乎是計數圖形畫素,不像流式細胞圖。能把figure legend貼上來嗎?

流式細胞儀檢測細胞週期dna含量結果圖怎樣分析和說明

7樓:匿名使用者

流式細胞儀檢測細胞週期dna含量結果圖怎樣分析和說明已經做完流式,看到結果卻不知該怎樣分析了。我用的是annexinv-fitc 凋亡試劑盒 ,annexinv/pi雙染檢測細胞凋亡。請教各位,凋亡散點圖中第1,2,4象限到底分別代表什麼細胞?

手裡的資料說法都不相同。試劑盒說明書:1代表細胞收集過程中機械性損傷的細胞,2 代表繼發性壞死細胞,4代表凋亡細胞。

有資料說:1代表壞死細胞,2代表晚期凋亡細胞,4代表早期凋亡細胞。我就不明白了,既然是凋亡,就算是晚期,細胞膜也會破壞?

還有的認為,2象限代表晚期凋亡和繼發性壞死的細胞。

我用的是美國beckman-coulter公司試劑盒,它的說明說上就是這麼寫的:

quadrant 3:viable cellsquadrant 4:apoptotic cellsquadrant 2:secondary necrotic cells

流式細胞儀觀察細胞週期樣品怎樣準備

8樓:匿名使用者

根據你所購買的試劑盒而定,一般是先用70%乙醇先固定,然後加rna酶和pi,半個小時左右上內機檢測就可以了.需要注意容的就是加酒精固定的時候要用四度預冷的酒精,緩慢的加,邊加邊晃動細胞,避免細胞黏連在一起.

(1)細胞培養

取對數生長期的細胞,按1x106個/ml以1ml體積接種於6孔板內。培養24h後,加入不同濃度樣品。在37 ℃、5 % 的co2恆溫箱中培養24h後終止。

(2)細胞固定

胰酶消化並離心收集細胞(800rpm/min),棄上清,用預冷pbs洗細胞兩次,加入預冷70%乙醇, -20℃固定儲存。

(3) 細胞染色

離心收集細胞(800rpm/min),以1ml的pbs洗細胞一次,加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙錠(pi),100ug/ml rnase a, 4℃避光孵育20分鐘。

(4)檢測

以標準程式用流式細胞儀檢測,汞激發波長488nm,計數8千個細胞,結果用軟體winmdi version 2.9分析。

流式細胞儀散點圖怎麼看,流式細胞術散點圖怎麼看?

你貼乙個圖上來,就圖說容易一些。散點圖,橫座標和縱座標一般都是不同的螢光。一般都有的是fsc和ssc。這個一般代表細胞的大小fsc和內部的折光性ssc。其他的散點圖,可以代表雙重染色時,每種螢光的訊號強弱 流式細胞儀是一種在螢光顯微鏡技術上的改良。在我們原來的實驗操作技術中,有一種螢光顯微技術,基本...

流式細胞儀的圖怎麼拷出來,流式細胞儀圖怎麼看

看你用的什麼機器好軟體了,一些軟體可以直接輸出為pdf或者jepg格式的圖,還有可以輸出fcs檔案,再用第三方軟體,比如flowjo來作圖 流式細胞儀圖怎麼看 要看圖具體說,pi單染的是壞死細胞及晚期凋亡細胞,annexin v fitc單染是我們需要的凋亡細胞,雙染是機械性壞死,未染細胞就是正常細...

流式細胞儀圖怎麼看,流式細胞儀結果圖如何看

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