1樓：南京金益柏生物科技****
這個比較省事兒的是用組織晶元做免疫組化，直接打分。比單張的組織切片更有說服力。
求助免疫螢光的結果分析
2樓：南京金益柏生物科技****
可以用image－pro plus分析灰度
免疫螢光的標本怎麼製作
3樓：南京金益柏生物科技****
免疫螢光的標本製作的基本程式和dab顯色的組化類似：
1 免疫螢光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其它相同2 免疫螢光的二抗使用不同螢光標記的二抗孵育，孵育時間根據抗體的工作濃度確定
3 二抗孵育之後充分洗片後即可貼片、封片和觀察4、免疫螢光在封片使用專用封片劑（如果你經費比較充足）或甘油：0.01mpbs （7：3）
5 封片後的標本4度冰箱儲存，照像後可以在－70度的冰箱儲存備用6 條件許可可以購買防淬滅的試劑加入封片劑中，標本可以儲存更久7 螢光抗體的孵育以及後續處理需要閉光
8 螢光抗體染色假陽性可能會多，需要設定陽性和陰性對照
免疫螢光的方法有什麼注意環節
4樓：南京金益柏生物科技****
1、冰凍切片製備：建議用新鮮組織，否則組織細胞內部結構破壞，易使抗原瀰散。選用乾淨鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴重。
2、組織切片固定：切好片風乾後立即用冰丙酮等固定液進行固定 5-10 min，尤其要較長時間儲存的白片，一定要及時固定和適當儲存。
3、血清封閉：為防止內源性非特異性蛋白抗原的結合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗**一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時間是可以調整的，一般 10-30 min。
5、二抗孵育條件：二抗一般室溫或 37℃ 立即觀察，若將標本放在聚乙烯塑膠袋中 4℃ 30 min-1h，具體時間需要摸索，而濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度，切記要避光反應。但在免疫螢光中我們一般先把二抗濃度和孵育時間先定下，然後去摸索一抗濃度和孵育時間。
最後，螢光素標記的二抗隨著儲存時間的延長，可能後有大量的游離螢光素殘留，需要注意配製時小包裝和並進行適當的離心。
6、復染：目的是形成細胞輪廓，從而更好地對目標蛋白進行定位。一般常用 dapi 復染。
7、封片：為了長期儲存，我們一般用緩衝甘油等封片，此外還有專門的抗螢光萃滅封片液。避免產生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然後一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對面的那個拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時為止；當發現液體接觸面在不斷瀰散時，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會產生氣泡。
8、切片清洗：為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當地加強清洗（延長時間和增多次數）尤為重要，我一般在一抗孵育前的清洗是 3 min*3 次，而一抗孵育後的清洗均為 5 次*5 min。注意：
單獨沖洗，防止交叉反應造成汙染。溫柔沖洗，防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式；沖洗的時間要足夠，才能徹底洗去結合的物質。
pbs 的 ph 和離子強度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓，當時我買的抗體稀釋液偏酸，結果背景一片黃（未見特異性染色），建議 ph 在 7.4-7.
6 濃度是 0.01 m。（中性及弱鹼性條件（ph7-8）有利於免疫複合物的形成，而酸性條件則有利於分解；低離子強度有利於免疫複合物的形成，而高離子強度則有利於分解）
9、拍照：有條件的話最好立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。使用螢光顯微鏡注意嚴格按照螢光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程式；應在暗室中進行檢查；防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡；檢查時間每次以1~2 h 為宜，超過 90 min，超高壓汞燈發光強度逐漸下降，螢光減弱；標本受紫外線照射 3~5 min 後，螢光也明顯減弱或褪色；激發光長時間的照射，會發生螢光的衰減和淬滅現象；所以最多不得超過 2~3 h；螢光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節省時間，保護光源。
天熱時，應加電扇散熱降溫，新換燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅後欲再啟用時，須待燈光充分冷卻後才能點燃。一天中應避免數次點燃光源。
關閉汞燈至少在開啟 15-30 分鐘後；標本染色後立即觀察，因時間久了螢光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑膠袋中 4℃ 儲存，可延緩螢光減弱時間，防止封裱劑蒸發；使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發螢光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無螢光鏡油；電源最好裝穩壓器，否則電壓不穩不僅會降低汞燈的壽命，也會影響鏡檢的效果。
做免疫螢光怎麼看蛋白是在細胞核表達還是胞漿表達
5樓：南京金益柏生物科技****
復染細胞核，常規用過的是dapi進行細胞核覆染（藍色）。目的是為了鑑別目的蛋白的位置是胞核表達，還是胞質表達或胞膜表達。
一般來講，如果是胞核表達，會和藍色的細胞核顏色重疊；胞質或胞膜表達則不會重合，單獨看目的蛋白的表達，會看到有個黑色的空洞的，尤其細胞影象更為明顯。
從樓主的**看，貌似是在胞核表達（因為紅色和綠色都很弱，在胞質沒有看到，相反卻和胞核重合了）
染色質量需要進一步提高。
6樓：匿名使用者
免疫組化和免疫螢光都是蛋白定位的檢測（也就是確定蛋白是表達在細胞核/漿/膜）。
免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡的現像和放大作用，在細胞，亞細胞水平檢測各種抗原物質，並可在原位顯示相應的基因和基因表達產物。免疫組織化學技術現已有：
免疫螢光組織（細胞）化學技術、免疫酶組織（細胞）化學技術、親和組織化學技術、免疫金銀及鐵標記免疫組織化學技術等。免疫螢光組織（細胞）化學技術是採用螢光素標記的已知抗體（或抗原）作為探針，檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原（或抗體），形成的抗原抗體複合物上帶有螢光素，在螢光顯微鏡下，由於受高壓汞燈光源的紫外光照射，螢光素發出明亮的螢光，這樣就可以分辨出抗原（或抗體）的所在位置及其性質，並可利用螢光定量技術計算抗原的含量。以達到對抗原物質定位、定性、定量測定的目的。
求助免疫螢光pi染核問題,求助免疫螢光PI染核問題
細胞試驗指南上dapi染核是在孵育完二抗之後，估計pi也可以在這時加。在論壇中查到的濃度不一，有10 50 m，有5ug 20ug ml,作用時間有5 30min不等，染完後pbs洗3遍，封片。用535 nm激發波長，615 nm發射波長觀察細胞。具體用哪一種合適估計得自己試了。求教關於免疫螢光的問...
求助免疫螢光染色用什麼封片,免疫螢光染色與活死染色可以一起做嗎
你可以用甘油封片 甘油 pbs 1 1 然後與和樹膠封片一樣，但要注意擦乾周圍，螢光顯微鏡觀察。免疫螢光染色與活死染色可以一起做嗎 免疫螢光染色方法快捷,靈敏.標本是冰凍切片,還是石蠟切片?切片的厚薄?影響到一抗孵育的時間.選用較佳的一抗的工作濃度.二抗需a液b液在室溫混合15分鐘後再用.標本需儲存...
求細胞懸液的免疫螢光步驟,求助細胞免疫螢光的詳細操作步驟
1.漂洗血清蛋白h7.2 7.4 37度 pbs 2小時.2.20度甲醇固定20分鐘後,自然 乾燥 10分鐘3.pbs洗淨 3min 3 4.1 triton 25min 30min.配成50ultriton 5mlpbs 5.pbs洗淨 2 5min 6.羊血清版 封閉 37度,權20分鐘 7.一...