1樓：濤濤濤
針對保守區域設計引物，片段長度小於250bp
如何運用ncbi設計q-pcr引物
2樓：
引物大嗎？ 如果二十幾個bp以上的話，能查出來 正向引物不變，反向引物找反向互補序列，(就是說aatcggatcctcj就要翻成gaggatccgatt)把這兩個序列用兩個空格分開，或者用逗號隔開去blast，為了精確，應該在高階選項限制條件裡選擇你要的那種生物，你要的那種基因（比如是酶就選擇酶那一類）。 然後在結果裡認真找哈~~
設計qrt-pcr引物時，乙個基因有多個變體，要選擇哪乙個來設計引物才能使定量準確些？
3樓：阿魯巴星人
1 基因有多種變體，該怎麼設計？
你如果僅僅檢測這個基因的表達量，你可以將引物設計在這多種變體的保守區域內，就是所有變體都包含的區域。如果你明確要檢測哪乙個變體，就設計在這個變體獨有的區域內。
2 引物blast後的產物有多種
你應該是在ncbi上進行的primer blast吧？你只要看到你的引物擴增出來的都是你要的目的基因就好了。在ncbi上有很多標記，一般認為nm的是ncbi上認可的reference的序列，nx是使用者上傳還未認證的序列，你忽略也是可以的。
predicted是指使用者**的序列，建議你還是用ncbi認證的序列。
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