革蘭染色法原理,革蘭氏染色法的原理

2022-02-17 02:40:11 字數 5052 閱讀 8084

1樓:逍遙九少

g﹢菌:細胞壁厚,肽聚醣網狀分子形成一種透性屏障,當乙醇脫色時,肽聚醣脫水而孔隙縮小,故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上。呈紫色。

gˉ菌:肽聚醣層薄,交聯鬆散,乙醇脫色不能使其結構收縮,其脂含量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結晶紫-碘複合物溶出細胞壁,番紅染液復染後呈紅色。

革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,2023年由丹麥醫師、細菌學家漢斯·克里斯蒂安·約阿希姆·革蘭氏創立。

細菌先經鹼性染料結晶紫染色,而經碘液媒染後,用酒精脫色,在一定條件下有的細菌紫色不被脫去,有的可被脫去,因此可把細菌分為兩大類,前者叫做革蘭氏陽性菌(g+),後者為革蘭氏陰性菌(g-)。為觀察方便,脫色後再用一種紅色染料如鹼性蕃紅、稀釋復紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色,陰性菌則被染上紅色。

有芽胞的桿菌和絕大多數的球菌,以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應;弧菌,螺旋體和大多數致病性的無芽胞桿菌都呈現負反應。

革蘭氏陽性菌體內含有特殊的核蛋白質鎂鹽與多醣的複合物,它與碘和結晶紫的複合物結合很牢,不易脫色,陰性菌複合物結合程度底,吸附染料差,易脫色,這是染色反應的主要依據。 另外,陽性菌菌體等電點較陰性菌為低,在相同ph條件下進行染色,陽性菌吸附鹼性染料很多,因此不易脫去,陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴格控制。

例如,在強鹼的條件下進行染色,兩類菌吸附鹼性染料都多,都可呈正反應;ph很低時,則可都呈負反應。此外,兩類菌的細胞壁等對結晶紫—碘複合物的通透性也不一致,陽性菌透性小,故不易被脫色,陰性菌透性大,易脫色。所以脫色時間,脫色方法也應嚴格控制。

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟。

常見的革蘭氏陽性菌有:葡萄球菌(staphylococcus)、鏈球菌(streptococcus)、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、白喉桿菌、破傷風桿菌等。

常見的革蘭氏陰性菌有痢疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、百日咳桿菌及霍亂弧菌等。

2樓:智慧型機械人

革蘭氏染色

一、目的:

在細胞發放之前,利用標準的革蘭氏染色法對即將發放的細胞懸液進行檢測,判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。

二、原理:

通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

3樓:喬明明

1.原理 革蘭氏染色的原理尚未完全闡明.目前主要有細菌等電點\化學結構及細胞膜通透性等三種學說:

(1)革蘭氏陽性菌等電點在ph2~3,比陰性菌(ph4~5)為低.因此陽性菌和鹼性染料的結合力比陰性菌強.

(2)革蘭氏陽性菌含有核糖核酸鎂鹽,易和結晶紫-碘複合物結合而不易脫色.

(3)革蘭氏陽性菌細胞壁及細胞膜的通透性較低.因此,染料和碘的複合物不易為乙醇所溶出.

所以陽性菌仍保持原來的紫色,而陰性菌染成的紫色可被酒精脫掉後復染成紅色.

4樓:匿名使用者

革蘭陽性菌細胞壁較厚乙醇脫色時,肽聚醣層通透性降低與細胞結合的結晶紫與碘的複合物在細胞壁仍保留初染時的顏色。革蘭陰性菌壁薄乙醇脫色增加了細胞壁的通透性,初染的結晶紫碘複合物滲出經復染又染上覆染的顏色

革蘭氏染色法的原理

5樓:暴走少女

革蘭氏染色法的原理是通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙。

因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差。

在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

6樓:秦也抱只貓

簡單來說:通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細菌細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,再用95%乙醇脫色。

具體來說:通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;

而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

g﹢菌:細胞壁厚,肽聚醣網狀分子形成一種透性屏障,當乙醇脫色時,肽聚醣脫水而孔隙縮小,故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上。呈紫色。

gˉ菌:肽聚醣層薄,交聯鬆散,乙醇脫色不能使其結構收縮,其脂含量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結晶紫-碘複合物溶出細胞壁,番紅染液復染後呈紅色。

7樓:立鶴尾

g+菌:細胞壁厚,肽聚醣網狀分子形成一種透性障,當乙醇脫色時,肽聚醣脫水而孔障縮小,故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上。呈紫色。

gˉ菌:肽聚醣層薄,交聯鬆散,乙醇脫色不能使其結構收縮,其脂含量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結晶紫-碘複合物溶出細胞壁,沙黃復染後呈紅色。

8樓:寵魅

革蘭氏染色法的原理是浸泡原理

革蘭氏染色的步驟和原理

9樓:江南蜜汁

原理:革蘭氏染色法可將所有的細菌區分為革蘭氏陽性菌(g+)和革蘭氏陰性菌(g-)兩大類,是細菌學上最常用的鑑別染色法。該染色法之所以能將細菌分為g+菌和g-菌,是因為一般認為革蘭氏染色是基於細菌細胞壁特殊化學組分進行染色的。

步驟:(一)塗片固定

在乾淨的載玻片**滴加一滴蒸餾水,用接種環進行無菌操作,挑取培養物少許,置載玻片的水滴中,與水混合做成菌懸液並塗佈成直徑約1cm的薄層。

(二)染色

在固定過的塗片菌膜上滴加草酸銨結晶紫染液,染色液應完全覆蓋整個菌膜,染色1min。

(三)水洗

染色到一定的時間,拿住玻片使之成450角,用細小的水流把多餘的染料沖洗掉,被菌體吸附的染料則保留。

(四)媒染

加碘液覆蓋塗面染1 min。在媒染處理時,媒染劑與染料形成不溶性的化合物,可增加染料和細菌的親和力。

(五)水洗,用吸水紙吸去水分

用細小的水流緩慢沖洗塗片上的染色液,用吸水紙吸乾。

(六)脫色

加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色, 20 s~30 s後再進行水洗,吸去水分。

(七)復染

蕃紅染色液染色10 s後, 自來水沖洗。

(八)乾燥,鏡檢

染色的結果,革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色。

擴充套件資料

標本乾燥後即進行固定,固定的目的有三個:

(1)殺死微生物,固定細胞結構。

(2)保證菌體能更牢固的粘附在載玻片上,防止標本水洗時被水沖洗掉。

(3)改變染料對細胞的通透性,因為死的原生質比活的原生質易於染色。

10樓:鵝子野心

操作步驟:

1 .塗片

將培養的不同菌分別作塗片(注意塗片切不可過於濃厚),乾燥、固定。固定時通過火焰1一2 次即可,不可過熱,以載玻片不燙手為宜。

2 .染色

( 1 )初染加草酸鉸結晶紫一滴,約一分鐘,水洗。

( 2 )媒染滴加碘液衝去殘水,並覆蓋約一分鐘,水洗。

( 3 )脫色將載玻片上面的水甩淨,並襯以白背景,用95 %酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止,約20 一30 秒鐘,立即用水沖淨酒精。

( 4 )復染用番紅液染1 一2 分鐘,水洗。

( 5 )鏡檢乾燥後,置油鏡觀察.革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準,過於密集的細菌,常常呈假陽性。

( 6 ) 同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合製片,作革蘭氏染色對比。

革蘭氏染色的關鍵在於嚴格掌握酒精脫色程度,如脫色過度,則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時,陰性菌可被誤染為陽性菌。此外,菌齡也影響染色結果,如陽性菌培養時間過長,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈陰性反應。

原理:革蘭氏染色反應是細菌分類和鑑定的重要性狀。它是1884 年由丹麥醫師gr 二創立的。

革蘭氏染色法(gram stain )不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類:染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,用g+表示:染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌,用g 一表示。

細菌對於革蘭氏染色的不同反應,是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由膚聚醣形成的網狀結構組成的,在染色過程中,當用乙醇處理時,由於脫水而引起網狀結構中的孔徑變小,通透性降低,使結晶紫一碘複合物被保留在細胞內而不易脫色,因此,呈現藍紫色;革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚醣含量低,而脂類物質含量高,當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁的通透性增加,使結晶紫一碘複合物易被乙醇抽出而脫色,然後又被染上了復染液(番紅)的顏色,因此呈現紅色。

革蘭氏染色需用四種不同的溶液:鹼性染料(basic dye )初染液;媒染劑(mordant ) ;脫色劑( decolorising agent )和復染液(counter stain )。鹼性染料初染液的作用象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣,而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫(crystal violet )。

媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使不易脫落,碘(iodine ) 是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同型別的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95 %的酒精(ethanol )。復染液也是一種鹼性染料,其顏色不同於初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,從而將細胞區分成g +和g 一兩大類群,常用的復染液是番紅。

革蘭染色有何實際意,革蘭染色在醫學上有何實際意義

革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,1884年由丹麥醫師gram創立。未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態 排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。革蘭氏染色屬復染法。革蘭染色在醫學上有何實際意義 革蘭...

細菌革蘭式染色檢查要多少錢,牙垢細菌革蘭染色圖片??

細菌革蘭氏染色鏡檢其實很便宜,不同地區但收費會有比較大的差異,但都不貴,可能只要十元左右。不過只是革蘭氏染色,不一定能做出最後的診斷,也不一定能為臨床 提供支援。可能需要進行細菌學的培養,並進行藥敏實驗,當然這是臨床醫生根據實際需要來建議患者進行檢查的。牙垢細菌革蘭染色 牙垢中細菌很多,各類菌型都有...

什麼是革蘭染色性

是對細菌染色的一種方法,具體操作和上面寫的一樣,就不囉嗦了。這樣染色的方法在醫學上面應用很廣。陽性菌是紫色,是因為其細胞壁比較厚,結構比較緻密,在第六步脫色的時候很難被脫色,所以呈現紫色。而陰性菌的壁的成分與陽性菌不同,且較疏鬆,所以可以被脫色,然後再被第七步染成紅色。在醫學上面,我們可以根據菌類的...