1樓：天馬行空設計
在溶劑體積相同的前提下，根據不同濃度稱取不同質量的蔗糖，溶解後，由高濃度到低濃度緩慢加到容器，如試管，應該就可以了吧，還是很容易分層的
蔗糖密度梯度離心中50%，52%，54%（w / w）溶液是如何配製的？比如50g蔗糖+50**，還是50g蔗糖+100**？ 10
2樓：枝子戀
w/w---溶液的濃度用溶質的質量佔全部溶液質量的百分率，以下類推：
蔗糖密度梯度50%：50g蔗糖+50**......
為什麼要用蔗糖作密度梯度離心?不同濃度的蔗糖不會因為擴散而聚到一起嗎
3樓：你真好菜
使用蔗糖密度梯度離心時，不同濃度的蔗糖為什麼會分層
純化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度離心法，能得到比較純的病毒。其過程如下：
1、將收集的組織或臟器或其他,用玻璃勻漿器充分研磨後製成懸液,經反覆凍融3 次後,置- 20 ℃冰箱中,備用。
2、先以5000g離心15分鐘後，獲取上清夜，然後再20000g高速離心30分鐘後取上清夜。
3、接著10萬g超速離心2h，將沉澱用少量ste溶解。
4、先在超速離心管中加入5-8ml的第3步所獲取的含病毒樣品的溶解液，然後在離心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的時候是用長針頭從底部往上加的。11萬g離心2.5h,發現在30 %與45 % 以及45 % 與60 %之間都有一條明亮的帶，用長針頭將兩條不同部位的帶都吸取出來，分別收集到不同的瓶內。
5、去蔗糖；用ste緩衝液適量稀釋純化的病毒，然後11萬g離心3h,用少量ste（根據沉澱的量決定加入多少）緩衝液把沉澱懸起，即最後獲得了純化的病毒。-20度凍純備用，用時可用分光光度計測定其病毒含量
蔗糖密度梯度離心法提出的蛋白含糖跑western時會不會有影響
4樓：陽光文學城
密度梯復度區帶
離心法（制簡稱區帶離心法），是bai將樣品加在惰du性梯度介質中進zhi行離心沉降或沉降dao平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區帶的分離方法。此法的優點是：①分離效果好，可一次獲得較純顆粒；②適應範圍廣，能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒，又能分離有一定浮力密度差的顆粒；③顆粒不會擠壓變形，能保持顆粒活性，並防止已形成的區帶由於對流而引起混合。
此法的缺點是：①離心時間較長；②需要製備惰性梯度介質溶液；③操作嚴格，不易掌握。
5樓：鄢雁桃不陶
因為蔗糖溶液在離心時，離心管內形成一連續或不連續的密度梯度，可以通過重力或離心力的作用使不同分子量的物質分離。
同樣可以用於密度梯度離心的還要氯化銫、氯化銣、多聚蔗糖等。
密度梯度離心法 應該怎麼操作？
6樓：匿名使用者
密度梯度離心法是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區帶的分離方法。此法的優點是：①分離效果好，可一次獲得較純顆粒；②適應範圍廣，能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒，又能分離有一定浮力密度差的顆粒；③顆粒不會擠壓變形，能保持顆粒活性，並防止已形成的區帶由於對流而引起混合。
此法的缺點是：①離心時間較長；②需要製備惰性梯度介質溶液；③操作嚴格，不易掌握。
密度梯度離心法又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種：
（1）差速區帶離心法：當不同的顆粒間存在沉降速度差時（不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降係數差）。在一定的離心力作用下，顆粒各自以一定的速度沉降，在密度梯度介質的不同區域上形成區帶的方法稱為差速區帶離心法。
此法僅用於分離有一定沉降係數差的顆粒（20% 的沉降係數差或更少）或分子量相差3倍的蛋白質，與顆粒的密度無關，大小相同，密度不同的顆粒（如線粒體，溶酶體等）不能用此法分離。
離心管先裝好密度梯度介質溶液，樣品液加在梯度介質的液面上，離心時，由於離心力的作用，顆粒離開原樣品層，按不同沉降速度向管底沉降，離心一定時間後，沉降的顆粒逐漸分開，最後形成一系列介面清楚的不連續區帶，沉降係數越大，往下沉降越快，所呈現的區帶也越低，離心必須在沉降最快的大顆粒到達管底前結束，樣品顆粒的密度要大於梯度介質的密度。梯度介質通常用蔗糖溶液，其最大密度和濃度可達1.28 g/cm3和60%。
此離心法的關鍵是選擇合適的離心轉速和時間
（2）等密度區帶離心法：離心管中預先放置好梯度介質，樣品加在梯度液面上，或樣品預先與梯度介質溶液混合後裝入離心管，通過離心形成梯度，這就是預形成梯度和離心形成梯度的等密度區帶離心產生梯度的二種方式。
離心時，樣品的不同顆粒向上浮起，一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上，形成幾條不同的區帶，這就是等密度離心法。體系到達平衡狀態後，再延長離心時間和提高轉速已無意義，處於等密度點上的樣品顆粒的區帶形狀和位置均不再受離心時間所影響，提高轉速可以縮短達到平衡的時間，離心所需時間以最小顆粒到達等密度點（即平衡點）的時間為基準，有時長達數日。
等密度離心法的分離效率取決於樣品顆粒的浮力密度差，密度差越大，分離效果越好，與顆粒大小和形狀無關，但大小和形狀決定著達到平衡的速度、時間和區帶寬度。
等密度區帶離心法所用的梯度介質通常為氯化絕cscl，其密度可達1.7 g/cm3。此法可分離核酸、亞細胞器等，也可以分離復合蛋白質，但簡單蛋白質不適用。
純化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度離心法，能得到比較純的病毒。其操作過程如下：
1、將收集的組織或臟器或其他,用玻璃勻漿器充分研磨後製成懸液,經反覆凍融3 次後,置- 20 ℃冰箱中,備用。
2、先以5000g離心15分鐘後，獲取上清夜，然後再20000g高速離心30分鐘後取上清夜。
3、接著10萬g超速離心2h，將沉澱用少量ste溶解。
4、先在超速離心管中加入5-8ml的第3步所獲取的含病毒樣品的溶解液，然後在離心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的時候是用長針頭從底部往上加的。11萬g離心2.5h,發現在30 %與45 % 以及45 % 與60 %之間都有一條明亮的帶，用長針頭將兩條不同部位的帶都吸取出來，分別收集到不同的瓶內。
5、去蔗糖；用ste緩衝液適量稀釋純化的病毒，然後11萬g離心3h,用少量ste（根據沉澱的量決定加入多少）緩衝液把沉澱懸起，即最後獲得了純化的病毒。-20度凍純備用，用時可用分光光度計測定其病毒含量。
7樓：匿名使用者
去看看吧。
使用蔗糖密度梯度離心時，不同濃度的蔗糖為什麼會分層？ 30
8樓：匿名使用者
當含有細小顆復粒的懸浮液靜置不動制時，由於重力場的bai作用使得懸du浮的顆粒逐漸下zhi
沉。粒子越重，下dao沉越快，反之密度比液體小的粒子就會上浮。微粒在重力場下移動的速度與微粒的大小、形態和密度有關，並且又與重力場的強度及液體的粘度有關。
象紅血球大小的顆粒，直徑為數微公尺，就可以在通常重力作用下觀察到它們的沉降過程。
此外，物質在介質中沉降時還伴隨有擴散現象。擴散是無條件的絕對的。擴散與物質的質量成反比，顆粒越小擴散越嚴重。
而沉降是相對的，有條件的，要受到外力才能運動。沉降與物體重量成正比，顆粒越大沉降越快。對小於幾微公尺的微粒如病毒或蛋白質等，它們在溶液中成膠體或半膠體狀態，僅僅利用重力是不可能觀察到沉降過程的。
因為顆粒越小沉降越慢，而擴散現象則越嚴重。所以需要利用離心機產生強大的離心力，才能迫使這些微粒克服擴散產生沉降運動。
離心就是利用離心機轉子高速旋轉產生的強大的離心力，加快液體中顆粒的沉降速度，把樣品中不同沉降係數和浮力密度的物質分離開
9樓：
因為蔗糖分子和水分子的質量不同…所以在離心時獲得的速度也就不同…所以會產生分層…
用蔗糖密度梯度和氯化銫密度梯度離心法分離生物大分子，在原理上有什麼不同
10樓：匿名使用者
大量提取的質粒dna一般需進一步純化,常用柱層析法和氯化銫梯度離心法。常使用的所有純化方法都利用了質粒dna 相對較小及共價閉合環狀這樣兩個性質。
為什麼採用蔗糖密度梯度離心
11樓：阿魯巴星人
因為蔗糖溶液在離心時，離心管內形成一連續或不連續的密度梯度，可以通過重力或離心力的作用使不同分子量的物質分離。
同樣可以用於密度梯度離心的還要氯化銫、氯化銣、多聚蔗糖等。
如何配製連續蔗糖密度梯度
12樓：火腿嘗
在溶劑體積相同的前提下，根據不同濃度稱取不同質量的蔗糖，溶解後，由高濃度到低濃度緩慢加到容器，如試管，應該就可以了吧，還是很容易分層的
使用蔗糖密度梯度離心時，不同濃度的蔗糖為什麼會分層
當含有細小顆復粒的懸浮液靜置不動制時，由於重力場的bai作用使得懸du浮的顆粒逐漸下zhi 沉。粒子越重，下dao沉越快，反之密度比液體小的粒子就會上浮。微粒在重力場下移動的速度與微粒的大小 形態和密度有關，並且又與重力場的強度及液體的粘度有關。象紅血球大小的顆粒，直徑為數微公尺，就可以在通常重力作...
蔗糖密度梯度離心法提出的蛋白含糖跑western時會不會有影響
密度梯復度區帶 離心法 制簡稱區帶離心法 是bai將樣品加在惰du性梯度介質中進zhi行離心沉降或沉降dao平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區帶的分離方法。此法的優點是 分離效果好，可一次獲得較純顆粒 適應範圍廣，能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒，又能分離有...
差速離心與密度梯度離心方法？要左右。。謝謝大家
差速離心主要是採取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細胞器。起始的離心速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉澱，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類推，達到分離不同大小顆粒的目的。密度梯度離心 density gradient centrifugat...