酵母雙雜文庫篩選出互作蛋白,然後再怎麼做

2021-03-10 20:08:28 字數 745 閱讀 1367

1樓:w別y雲j間

然後酵母雙雜交技術檢測指定蛋白對之間的相互作用。

比如:1、誘餌專蛋白屬表達載體與獵物蛋白表達載體的構建

2、表達載體轉化酵母的驗證及自啟用活性,毒性檢測

3、誘餌蛋白質粒與獵物蛋白質粒共轉化酵母的驗證以及相互作用的檢測報告

4、 無相互作用時誘餌和獵物蛋白的表達情況的western blotting檢測

酵母雙雜交技術優點:

①高效:轉化方法簡單,轉化效率高,便於操作。

②靈敏:可檢測蛋白質之間的微弱作用。

③真實:酵母細胞是真核細胞,融合蛋白之間的相互作用是在真核細胞核內進行的,蛋白質經過翻譯後的修飾,多數可以保持蛋白質的天然空間構象和摺疊狀態,接近其真實的生理狀態,一定程度上可代表其在細胞內真實情況。

④簡捷:只需要構建誘餌表達載體,可以省略蛋白質抽提純化或抗體製備的繁瑣步驟。

2樓:匿名使用者

酵母雙雜文庫篩選出互作蛋白之後,可以看一下敲除互作蛋白,對目的蛋白有什麼影響版

。再尋權找一下在互作蛋白的突變型中,目的蛋白有什麼變化

而且酵母雙雜的假陽性很高,最好在原來的研究的生物系統中再驗證一下,比如免疫共沉澱實驗在驗證以便。主要還是看目的蛋白有什麼功能,那個互作蛋白又是什麼,能夠給目的蛋白帶來什麼變化,把這種互作的功能研究一下,也就能知道目的蛋白的部分作用了。

3樓:我們飛哈

體外驗證。western體外pulldown驗證吧